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zhymhbu

木虫 (正式写手)

[求助] 芽孢杆菌的表征，SEM STM 环境扫描电镜

自己分离到一个芽孢杆菌，准备一个分离菌种和发酵特性的文章。

想要用电镜表征一下菌体，包括营养体和芽孢体

用SEM很多，但是需要固定什么的

听说环境扫描电镜不需要处理，更适合微生物表征

有做过相关分析的朋友吧，期待指教。做环扫电镜，对微生物样品有什么要求，需要怎么处理样品
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微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
1楼 2011-09-23 08:49:32
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COXEM

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhymhbu(金币+1): 好专业的回答。谢谢了 2011-09-27 10:08:42
rainwander(金币+3, MicEPI+1): 鼓励交流 2011-09-27 10:34:52
正常情况下，高真空模式图像质量和分辨率都要好。
微生物细胞等含水量大，不耐真空，真空脱水变形严重，在高真空或者低真空常规模式下观察，都需要按照常规方法制样，尽可能的保持细胞原装到干燥为止，一般相对新鲜的细胞或者微生物原貌，一般会有大约10-15%的收缩，有些芽孢类收缩率高达60%，。就像枣，鲜枣和干枣外形有些不一样，但我们都还知道那是枣，些许收缩，一般应该不会影响识别，估计大家也都认可。
常规或者换扫的差别主要体现在，是否追求活鲜的原貌。
在追求活鲜微小生命体原貌的道路上，冷冻电镜技术走在前面，一种使用常规高真空模式观察新鲜微生物或者细胞原貌。在电镜样品室安装专门的冷冻样品台，在样品室内首先进行冷冻，然后切割露出组织或者细胞，在电镜样品室内喷金或者不喷金（组织体液具有一定导电性）直接观察形貌。冷冻电子显微术实现了高分辨观察微小生物体新鲜原貌，但的我知道的国内某单位招标的最贵冷冻台价格大约70万人民币，代价很高。
无论如何冷冻电镜技术在操作技术上上还是比较难的，而且要获得好的效果，代价高昂，
因此，生命科学显微工作者发明了环境扫描电镜技术，并进行常规扫描电镜的改造推广， 这个技术后来卖给了飞利浦，现在的FEI环境扫描电镜。可以观察新鲜的微小生命体的原貌，当然设置好条件，你也可以动态观察，细胞水分挥发，收缩变形的过程。
从指标上看环境扫描电镜分辨率也非常高，不过国内做环扫的大多水平不高，这个和使用机制有关系，大多数情况下得不到好的结果，也许实验室的操作人员会建议你使用环境扫描电镜的常规模式。
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10楼2011-09-27 01:14:56
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COXEM

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
rainwander(金币+3): 鼓励交流 2011-09-25 20:06:52
zhymhbu(金币+1): 谢谢指导 2011-09-26 15:05:28
内容已删除
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2楼2011-09-25 10:50:21
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bohr86

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-09-25 20:06:58
zhymhbu(金币+1): 谢谢 2011-09-26 15:08:59
直接将菌固定在电镜载物台大小的玻片上然后用导电胶贴在载物台上就可以了啊，没啥要处理的，不复杂～
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3楼2011-09-25 13:21:08
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zhymhbu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by COXEM at 2011-09-25 10:50:21:
环境扫描电镜技术没有问题,但国内对此的认识普遍有问题.
当摆设的多，事实上配置不完善的多，对于生命科学的探索，代价确实很高。
看一下这个科普视频：
动态观察水在冷玻璃上凝聚和蒸发的过程，这就是环境扫描 ...

那么对于投期刊。环境扫描和普通SEM，那该认可度高呢。。就是一个菌种照片和芽孢照片
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微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
4楼2011-09-26 15:06:36
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zhymhbu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bohr86 at 2011-09-25 13:21:08:
直接将菌固定在电镜载物台大小的玻片上然后用导电胶贴在载物台上就可以了啊，没啥要处理的，不复杂～

我前天打电话咨询，听说菌体也要固定。不知道为什么，照出来效果和SEM相比有什么优缺点呢
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微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
5楼2011-09-26 15:08:45
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陈浩南-1987

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zhymhbu(金币+1): 2011-09-26 19:24:08
建议用原子力显微镜，发的文章分数高
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6楼2011-09-26 15:52:09
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zhymhbu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 陈浩南-1987 at 2011-09-26 15:52:09:
建议用原子力显微镜，发的文章分数高

是吗。AFM优于SEM和ESEM。有什么依据吗。对于文章发表
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7楼2011-09-26 17:03:52
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COXEM

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【答案】应助回帖

zhymhbu(金币+1): 谢谢回复 2011-09-26 19:23:52
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhymhbu at 2011-09-26 15:06:36:
那么对于投期刊。环境扫描和普通SEM，那该认可度高呢。。就是一个菌种照片和芽孢照片

没有任何关系. 环境扫描电镜对于科学研究有帮助, 这需要去发现二者到底有什么差异.一般而言,普通扫描电镜需要严格样品制备,程序复杂.而ESEM可以减少很多步骤.
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8楼2011-09-26 19:18:47
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zhymhbu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by COXEM at 2011-09-26 19:18:47:
没有任何关系. 环境扫描电镜对于科学研究有帮助, 这需要去发现二者到底有什么差异.一般而言,普通扫描电镜需要严格样品制备,程序复杂.而ESEM可以减少很多步骤.

那么二者照出的菌体细胞图片清晰度，和分辨率什么的有区别吗。清晰度谁更好呢
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微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
9楼2011-09-26 19:24:56
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