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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » QPCR 阴性对照没有加模板 为什么还有溶解曲线峰
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jj_ocean

铜虫 (初入文坛)

[求助] QPCR 阴性对照没有加模板 为什么还有溶解曲线峰 已有1人参与

QPCR 阴性对照没有加模板cDNA,用水代替， 为什么还有溶解曲线峰?有加引物，并且阴性溶解曲线的峰和相应的加有模板的峰的温度是一致的！
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1楼 2011-09-22 09:24:41
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tcguobing

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看上去感觉是引物污染了？不过我也是新手~
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2楼2011-10-25 14:43:30
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xiaoche

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-10-27 09:41:42
有可能是引物二聚体。楼主看看溶解曲线和别的一样吗？
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3楼2011-10-26 21:57:26
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.你的引物不好，会形成二聚体，同时TM一致极可能说明二聚体和你的产物一样，也就是引物特异性不高，没有特异性产物。
2.可能引物被cDNA污染，这个有个简单的排除办法，你做3个加入不同浓度cDNA。最后CT值应该会依次降低，或升高。如果出现这个趋势，说明PCR产物是从模板P出来的，引物被污染。同理，如果没出现趋势，则说明是引物二聚体。
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4楼2011-10-27 09:46:22
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qlj0125

铜虫 (初入文坛)
我最近也是遇到了这样的问题，好郁闷啊
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不为失败找理由，只为成功想办法
5楼2012-03-13 14:59:32
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sicauwht

金虫 (正式写手)
我做的定量PCR始终有阴性，阴性就是用水来代替模版。而且水也是我自己灭过两次，也过滤了的，而且我跑普通的PCR的验证过都没阴性。但是就是定量的时候有，我做的是功能基因。谁可以告诉我这是什么原因造成的啊，有什么解决办法么？会是PCR程序的问题么？

我也是做的RT-qPCR
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被时代和社会和谐的80后！
6楼2012-07-16 20:03:51
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梦幻心雨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by sicauwht at 2012-07-16 20:03:51
我做的定量PCR始终有阴性，阴性就是用水来代替模版。而且水也是我自己灭过两次，也过滤了的，而且我跑普通的PCR的验证过都没阴性。但是就是定量的时候有，我做的是功能基因。谁可以告诉我这是什么原因造成的啊，有什 ...

请问您的问题后来解决了吗，我最近也遇到这问题，谢谢！
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科研工作于我若即若离。。。
7楼2017-03-05 16:13:28
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