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jj_ocean

铜虫 (初入文坛)

[求助] QPCR 阴性对照没有加模板 为什么还有溶解曲线峰 已有1人参与

QPCR 阴性对照没有加模板cDNA,用水代替, 为什么还有溶解曲线峰?有加引物,并且阴性溶解曲线的峰和相应的加有模板的峰的温度是一致的!
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tcguobing

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看上去感觉是引物污染了?不过我也是新手~
2楼2011-10-25 14:43:30
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xiaoche

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-10-27 09:41:42
有可能是引物二聚体。楼主看看溶解曲线和别的一样吗?
3楼2011-10-26 21:57:26
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.你的引物不好,会形成二聚体,同时TM一致极可能说明二聚体和你的产物一样,也就是引物特异性不高,没有特异性产物。
2.可能引物被cDNA污染,这个有个简单的排除办法,你做3个加入不同浓度cDNA。最后CT值应该会依次降低,或升高。如果出现这个趋势,说明PCR产物是从模板P出来的,引物被污染。同理,如果没出现趋势,则说明是引物二聚体。
4楼2011-10-27 09:46:22
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qlj0125

铜虫 (初入文坛)

我最近也是遇到了这样的问题,好郁闷啊
不为失败找理由,只为成功想办法
5楼2012-03-13 14:59:32
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sicauwht

金虫 (正式写手)

我做的定量PCR始终有阴性,阴性就是用水来代替模版。而且水也是我自己灭过两次,也过滤了的,而且我跑普通的PCR的验证过都没阴性。但是就是定量的时候有,我做的是功能基因。谁可以告诉我这是什么原因造成的啊,有什么解决办法么?会是PCR程序的问题么?

我也是做的RT-qPCR
被时代和社会和谐的80后!
6楼2012-07-16 20:03:51
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梦幻心雨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by sicauwht at 2012-07-16 20:03:51
我做的定量PCR始终有阴性,阴性就是用水来代替模版。而且水也是我自己灭过两次,也过滤了的,而且我跑普通的PCR的验证过都没阴性。但是就是定量的时候有,我做的是功能基因。谁可以告诉我这是什么原因造成的啊,有什 ...

请问您的问题后来解决了吗,我最近也遇到这问题,谢谢!
科研工作于我若即若离。。。
7楼2017-03-05 16:13:28
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