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lingonghua

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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-20 08:00:25

引物有没有问题？
我这两天做PCR，开始能扩出来，后来优化完善体系的时候反而扩不出来了。然后把原先备份的引物粉末重新溶解稀释，就又能扩出来了。

另一个是dNTP，我的40微升体系，一开始用4微升扩不出来，减到2微升反而能扩出来。

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31楼2011-09-18 17:40:32

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老夏853

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31楼: Originally posted by lingonghua at 2011-09-18 17:40:32:
引物有没有问题？
我这两天做PCR，开始能扩出来，后来优化完善体系的时候反而扩不出来了。然后把原先备份的引物粉末重新溶解稀释，就又能扩出来了。

另一个是dNTP，我的40微升体系，一开始用4微升扩不出来，减 ...

这个引物我当初合成的时候2OD 分装两管发现做不出来的时候我另一管也用了依然做不出来
你说那个DNTP,我们用的是混合好的mix 里面的dntp 各是0.4mM ~~

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32楼2011-09-18 20:29:59

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jinkui960

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感觉象是DNA的模板浓度太高，稀释模板试试，祝好运！

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33楼2011-09-19 09:08:36

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老夏853

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33楼: Originally posted by jinkui960 at 2011-09-19 09:08:36:
感觉象是DNA的模板浓度太高，稀释模板试试，祝好运！

恩老师您好
我现在已经稀释过 10,20,50.100倍，效果时一样的

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34楼2011-09-19 10:09:24

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jinkui960

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dhd997(金币+2): good 2011-09-20 08:00:43

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34楼: Originally posted by 老夏853 at 2011-09-19 10:09:24:
恩老师您好
我现在已经稀释过 10,20,50.100倍，效果时一样的

建议换用其他同学的PCR扩增体系，包括去离子水，dNTP，如果还不行的话可能就是模板的问题，重新提模板试试！

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35楼2011-09-19 12:57:16

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老夏853

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35楼: Originally posted by jinkui960 at 2011-09-19 12:57:16:
建议换用其他同学的PCR扩增体系，包括去离子水，dNTP，如果还不行的话可能就是模板的问题，重新提模板试试！

恩谢谢老师
我们用的是混合的extaq 酶  takara 的
水是我问养细胞的同学要的超纯水，
再就是加的 BSA 作为保护剂
东西都换过  也重新提过模板
我现在就怀疑是不是这个体系  用来做土壤DNA 这样成分复杂的模板是不合适的 ~ 可是也不知道究竟从何下手，退火温度以前用60度曾经做出来过就是上面第二张图那样子的我现在把上下5度的都试过了  依然~~
现在倒好连个条带都么有全部成弥散了 ~~

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36楼2011-09-19 13:43:50

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