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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR 总是呈现涂抹状 求解答！
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] PCR 总是呈现涂抹状 求解答！ 已有16人参与

最近做pcr 总是呈现这种涂抹状，原来一直以为是用的taq 酶 mix 没有反应完所致 ，今天专门点了两个孔的 mix 结果泳道是干净的 也不知道这样的抹带究竟是什么原因造成的 请做PCR 经验丰富的朋友指点  电泳图片 就这样的


有时候p 出来 也会有这种抹带的样子
照片这样的



[ Last edited by 老夏853 on 2011-9-14 at 18:00 ]
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1楼 2011-09-14 17:17:15
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
35楼: Originally posted by jinkui960 at 2011-09-19 12:57:16:
建议换用其他同学的PCR扩增体系，包括去离子水，dNTP，如果还不行的话可能就是模板的问题，重新提模板试试！

恩 谢谢老师
我们用的是混合的extaq 酶  takara 的  
水是我问养细胞的同学要的超纯水，
再就是加的 BSA 作为保护剂
东西都换过  也重新提过模板
我现在 就怀疑是不是这个体系  用来做土壤DNA 这样成分复杂的模板是不合适的 ~ 可是也不知道究竟从何下手， 退火温度   以前用60度 曾经做出来过 就是上面第二张图那样子的    我现在把上下5度的都试过了  依然~~
现在倒好 连个条带都么有 全部成弥散 了 ~~
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36楼2011-09-19 13:43:50
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小鸟剑客

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
是不是跑电泳的问题啊，
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2楼2011-09-14 19:19:39
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
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wanhscn(金币+2): 同意！ 2011-09-15 08:49:04
pcr体系不太合适。。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-09-14 20:30:03
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cloverplm

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 四叶草MM很活跃哦 2011-09-14 22:19:34
一个个排除吧！胶，电泳条件（电压，缓冲液，电泳时间等）， 引物，PCR条件等。另外你加样的时候要注意下，有不少挂孔的啊！
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净——静——竞——进
4楼2011-09-14 20:30:53
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