| 查看: 2980 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
chenzhenwei0铜虫 (小有名气)
|
[求助]
关于斑点检测抗体来源，做免疫印迹做不下去了，会不会是一抗出问题了？
|
|
|
我用的二抗是HRP标记的兔抗牛，但是一抗最初说是牛源的，但是后来感觉不太可靠，实验怎么都没有结果。目前通过试剂说明知道一抗可能是牛、兔、羊的，后来想到用DOT实验来检测血清来源以进一步实验，因此有买了二抗兔和羊的（由于一抗不好买其他的），但是经过几次的发现，羊的二抗有显色反应，但是也不很明显, 以下是我的操作方法，请高手指教，谢谢了哈 第一步：将标准阳性血清分别滴于三小块NC膜中央，使充分干燥,蛋白完全粘附与NC膜上，约1h。 第二步： 分别将膜放置于封闭盒中，用20ml含5%脱脂奶粉的PBST封闭1h，倾去封闭液，用PBST对膜稍作漂洗1次30s 第四步： 分别于膜中央滴加二抗辣根辛过氧化物标记的兔抗牛、兔抗羊、羊抗兔40ul, 再用含1%脱脂奶粉的PBST进行孵育1h,孵育二抗后用PBST润洗三次。 第五步： 用小镊子分别将膜从封闭盒取出，置于小平皿中，滴加临时配制的DAB进行显色10min。 是不是操作有问题，感觉结果不理想啊 [ Last edited by 1949stone on 2011-9-6 at 10:41 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有265人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用酶联免疫斑点法检验人HLA2 Ⅰ抗体的新法
已经有0人回复
3楼2011-11-24 17:20:42
chenzhenwei0
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 232.4
- 红花: 1
- 帖子: 54
- 在线: 31.8小时
- 虫号: 1169603
- 注册: 2010-12-14
- 专业: 兽医免疫学
2楼2011-09-13 15:19:26
chenzhenwei0
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 232.4
- 红花: 1
- 帖子: 54
- 在线: 31.8小时
- 虫号: 1169603
- 注册: 2010-12-14
- 专业: 兽医免疫学
4楼2012-03-03 17:04:50
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助哦 2012-03-05 11:02:08
chenzhenwei0(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-06 09:45:48
chenzhenwei0(金币+2): ★★★很有帮助 2012-03-07 15:28:49
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助哦 2012-03-05 11:02:08
chenzhenwei0(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-06 09:45:48
chenzhenwei0(金币+2): ★★★很有帮助 2012-03-07 15:28:49
w我看了你的步骤，你的应该是正确的做法，。从你的结果来看，应该是二抗结合一抗的能力很弱，所以造成显色不明显。另外也要考虑是不是显示也有问题，如果是三种不同来源的二抗的话，理论上讲，结合一抗的能力应该是有所区别的，如果三个二抗都很弱的话，也可以换个显色液试试 。不过你的做法还是很好的，很少有学生能想到这么做，赞一个 |
5楼2012-03-03 17:45:47
