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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE
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liukgg

木虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE

最近做谷氨酸棒杆菌诱导蛋白的蛋白电泳，不知道什么原因跑出来的结果没有条带，我是跑的全菌体，加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟（做了两次，一次五分钟，一次十分钟），上样20µl，浓缩胶跑的电压是90v，分离胶是120v，跑出来的结果是MAEKER正常，其他泳道什么都没有。自己一块跑的纯化的蛋白没有问题（一块制的胶）。诱导后的发酵液取100µl后离心能都看到挺多的菌体沉淀，第一次遇见这种情况，请大家帮忙分析一下原因。谢谢
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山水凤凰
1楼 2011-09-02 21:55:30
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liukgg

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-09-07 19:31:22:
我用大肠杆菌做全菌体蛋白SDS-PAGE，不需要超声裂解效果也是很好的

估计还是你那菌比较坚韧，没裂解开。。。。超声一下吧

应该是这样，试一下看看吧
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山水凤凰
12楼2011-09-07 22:22:53
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一毫升的枪

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

话说你的全菌体是怎么取的？
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2楼2011-09-03 05:38:14
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liukgg

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 一毫升的枪 at 2011-09-03 05:38:14:
话说你的全菌体是怎么取的？

就是取诱导后的发酵液直接离心得到全菌体
赞一下 回复此楼
山水凤凰
4楼2011-09-03 10:24:30
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塞外雨

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-03 17:12:27
跑的全菌体，加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟
这样能把菌体完全裂解吗？超声试试。你的金属浴温度到了１００度，ＥＰ管内的菌体受到温度还是比这个低的。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

liukgg
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
5楼2011-09-03 17:02:20
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