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新人小玥

木虫 (正式写手)

[求助] 植物DNA提取问题

最近在提两种植物的DNA,都出现以下情况:
1、CTAB裂解之后溶液比较粘稠
2、用氯仿异戊醇抽提3次后用冰无水乙醇和醋酸钠沉淀,沉淀后用TE溶解,DNA溶液还是比较粘稠
3、PCR检测无任何产物
4、另外用试剂盒提取后同样遇到上述问题

请问这是什么问题?如何解决呢?麻烦各位高手帮我出谋划策一下吧~~
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
新人小玥(金币+3): 谢谢您的建议,我再溶几天试试 2011-09-01 15:50:47
silicare(金币+3, BioEPI+1): 谢谢参与 2011-10-24 12:04:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by 新人小玥 at 2011-09-01 13:38:53:
我仅仅溶解过夜了;
刚才用DNA跑胶检测也没有产物,只有几个样品出现淡淡的条带。我感觉像没提出来,不知道是为什么。

很粘稠一般都有。用枪头挑会看见明显的一根根长丝状,说明dna聚集在一起。拿去跑胶的时候,只要取到这种丝状dna的区域,一般都很多,但是没有取到的时候,电泳出来的DNA条带就很浅。CTAB法提出来的DNA溶解时间一定要长,因为它分布很不均匀,总是聚集成团状。也不是很好稀释。
How about the future?
4楼2011-09-01 14:44:51
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

新人小玥(金币+3): 2011-09-01 13:39:16
溶解花了多长时间?以前提水稻的DNA是37度培养箱溶解一周。
PCR检测模板的量用的多大比例?最好稀释一下,或者用少一点。
How about the future?
2楼2011-09-01 12:52:40
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新人小玥

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by w2boluo at 2011-09-01 12:52:40:
溶解花了多长时间?以前提水稻的DNA是37度培养箱溶解一周。
PCR检测模板的量用的多大比例?最好稀释一下,或者用少一点。

我仅仅溶解过夜了;
刚才用DNA跑胶检测也没有产物,只有几个样品出现淡淡的条带。我感觉像没提出来,不知道是为什么。
3楼2011-09-01 13:38:53
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longrna

新虫 (正式写手)

1.你提取的是什么植物?有些植物的DNA由于含有丰富的酚或多糖等跟DNA性质很接近的杂质,在提取过程难以很严格的跟DNA分开。
2.造成粘稠的原因很多:
a.样品中富含多糖类物质(优化裂解体系)
b.样品量使用过多(减少样品使用量,增加裂解液)
3.溶解后先电泳及测OD情况如何?电泳点样孔是否有杂质?
个人建议:
1)取一容易做的植物(如水稻叶片)同时操作以作对照,以检测整个体系及实验操作有没有问题。
2)液氮研磨充分后加入裂解液,65度水浴30-60min,其间每隔5min混匀一次。
3)溶解时加入适量的TE后,50度水浴30-60min甚至过夜。
伟大航线....
6楼2011-11-03 09:59:26
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