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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 植物DNA提取问题
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新人小玥

木虫 (正式写手)

[求助] 植物DNA提取问题

最近在提两种植物的DNA，都出现以下情况：
1、CTAB裂解之后溶液比较粘稠
2、用氯仿异戊醇抽提3次后用冰无水乙醇和醋酸钠沉淀，沉淀后用TE溶解，DNA溶液还是比较粘稠
3、PCR检测无任何产物
4、另外用试剂盒提取后同样遇到上述问题

请问这是什么问题？如何解决呢？麻烦各位高手帮我出谋划策一下吧~~
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1楼 2011-09-01 11:24:06
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

新人小玥(金币+3): 2011-09-01 13:39:16
溶解花了多长时间？以前提水稻的DNA是37度培养箱溶解一周。
PCR检测模板的量用的多大比例？最好稀释一下，或者用少一点。
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How about the future？
2楼2011-09-01 12:52:40
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新人小玥

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by w2boluo at 2011-09-01 12:52:40:
溶解花了多长时间？以前提水稻的DNA是37度培养箱溶解一周。
PCR检测模板的量用的多大比例？最好稀释一下，或者用少一点。

我仅仅溶解过夜了；
刚才用DNA跑胶检测也没有产物，只有几个样品出现淡淡的条带。我感觉像没提出来，不知道是为什么。
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3楼2011-09-01 13:38:53
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
新人小玥(金币+3): 谢谢您的建议，我再溶几天试试 2011-09-01 15:50:47
silicare(金币+3, BioEPI+1): 谢谢参与 2011-10-24 12:04:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by 新人小玥 at 2011-09-01 13:38:53:
我仅仅溶解过夜了；
刚才用DNA跑胶检测也没有产物，只有几个样品出现淡淡的条带。我感觉像没提出来，不知道是为什么。

很粘稠一般都有。用枪头挑会看见明显的一根根长丝状，说明dna聚集在一起。拿去跑胶的时候，只要取到这种丝状dna的区域，一般都很多，但是没有取到的时候，电泳出来的DNA条带就很浅。CTAB法提出来的DNA溶解时间一定要长，因为它分布很不均匀，总是聚集成团状。也不是很好稀释。
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How about the future？
4楼2011-09-01 14:44:51
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泰州木虫
5楼2011-10-24 10:05:14
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longrna

新虫 (正式写手)
1.你提取的是什么植物？有些植物的DNA由于含有丰富的酚或多糖等跟DNA性质很接近的杂质，在提取过程难以很严格的跟DNA分开。
2.造成粘稠的原因很多：
a.样品中富含多糖类物质（优化裂解体系）
b.样品量使用过多（减少样品使用量，增加裂解液）
3.溶解后先电泳及测OD情况如何？电泳点样孔是否有杂质？
个人建议：
1）取一容易做的植物（如水稻叶片）同时操作以作对照，以检测整个体系及实验操作有没有问题。
2）液氮研磨充分后加入裂解液，65度水浴30-60min,其间每隔5min混匀一次。
3）溶解时加入适量的TE后，50度水浴30-60min甚至过夜。
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伟大航线....
6楼2011-11-03 09:59:26
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蒲公英点点

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
915066楼: Originally posted by w2boluo at 2011-09-01 12:52:40:
溶解花了多长时间？以前提水稻的DNA是37度培养箱溶解一周。
PCR检测模板的量用的多大比例？最好稀释一下，或者用少一点。

检测的时候，DNA加多点不是条带更亮吗？为什么要少用点？
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7楼2012-05-02 17:14:59
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蒲公英点点

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
920051楼: Originally posted by w2boluo at 2011-09-01 14:44:51:
很粘稠一般都有。用枪头挑会看见明显的一根根长丝状，说明dna聚集在一起。拿去跑胶的时候，只要取到这种丝状dna的区域，一般都很多，但是没有取到的时候，电泳出来的DNA条带就很浅。CTAB法提出来的DNA溶解时间一 ...

你们提出的DNA一般是什么颜色，我提的为什么总是看着像是杂质很多呢！都不是白色的，而且很多时候都不怎么溶解，还能见沉淀，这样是不是不能用？还有溶解DNA时候加的水，到底应该加多少才合适?求指教！
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8楼2012-05-02 17:17:23
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yunhaiyupan

新虫 (初入文坛)
为什么在加入异丙醇的时候可以看到丝状物出现，而最后电泳检测出来没有东西，也往各位大侠指导指导，谢谢！
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9楼2012-07-25 11:18:28
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