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ccs411

木虫 (正式写手)

[求助] C18柱子堵了(详见内容)

情况是这样的:我要分离的核苷酸,但是含有水解的酶,使用C18柱(2.7μm,4.6*50mm,预装柱)分离,进过几针样后(样品用0.22的膜过滤过的),柱压不断上升(每次用时,柱压都比前一次升高),但是,流动相和流速每次都一样。现在,在不上样时,0.1ml流速的柱压达到80bar左右。请厂家来看了,说是柱子被蛋白堵了。
请教给位前辈,有什么好的方法解决赌柱问题?另外,在上C18柱子前,还有什么好的办法把蛋白去除,而不会影响我的核苷酸?
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freebcw

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


qinhy(金币+1): 谢谢应助回帖~ 2011-08-23 18:55:15
ccs411(金币+5): 谢谢 2011-08-23 21:42:12
ccs411(金币+2): 2011-09-15 12:21:58
1.蛋白质属于强极性物质,进入色谱柱内被强力吸附,一般被蛋白堵了的话柱子就废了,也可以死马当活马医,找一种强极性溶剂冲洗,看能不能冲洗掉。
2.进样前去除蛋白一般可以采用离心或者蛋白质变性的方法,也可以两者结合。
祝你成功!!!
苦海无涯,药为人先
2楼2011-08-23 16:04:12
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totoyoyo1997

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

ccs411(金币+2): 2011-08-25 12:22:05
ccs411(金币+1): 2011-09-15 12:22:03
最好是试用前了解化合物的结构特性,根据要求选择合适的柱子。
3楼2011-08-25 09:51:57
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