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zqt123_1981

木虫 (小有名气)


[交流] 关于RNA提取过程中的问题

各位小弟用试剂盒第一次提取RNA的时候出来结果了,后来再提就没有结果了,不知道是什么原因啊。一开始用的柱式试剂盒。里面的无Rnase的离心管用完了。我又换的Axygen的盒装离心管,离心管是在自封袋里装着的外面有个纸盒标着无Rnase等。我想问一下自封袋开口后对剩余的离心管有影响吗,我老担心会污染,用紫外线照射能灭火Rnase吗?因为里面的离心管全都是开着盖的。别的东西枪头都是盒装的,怎么提不出来啊。
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wzqno

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
zqt123_1981(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): Good!我以前也是在通风橱,后面熟练了就在外面找个角落做了。 2011-08-19 18:43:37
我提RNA的时候也没用试剂盒,就买了DEPC和trizol,所有的枪尖和EP管都用0.1%DEPC水过夜浸泡,然后高温灭菌(普通灭菌都不行,紫外照射估计更不行),提的时候在通风橱里操作的。你最好把所有的枪尖管子,再好好消毒一下吧
4楼2011-08-19 15:33:04
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★ ★ ★
zqt123_1981(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): 鼓励,还没转正啊? 2011-08-19 12:07:57
开口后也没关系,只要放好,不让灰尘落里面就好。拿出来的时候小心倒出来,戴手套,尽量不要接触其他管子。
紫外应该不行,不然也不会用到DEPC这么毒的东西了。提不出来原因很多,但直接用Rnase的耗材的话,这方面应该不是原因。考虑下改进提取步骤吧。
2楼2011-08-19 10:11:49
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fangni

新虫 (正式写手)


★ ★ ★
zqt123_1981(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): 其实手套不换也ok,手指不要乱碰东西就好啦 2011-08-19 18:42:44
是不是RNA给降解了呀,我们提的时候没买盒子,用的Trizol法,效果还可以,其它都是用DEPC水浸泡后灭菌用的,不过提取的过程中要求勤换手套,戴口罩,尽量不说话,有时候实验室人太多也可能有影响
3楼2011-08-19 15:15:55
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