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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

[求助] 为什么我配的MS不凝固

MS培养基加了琼脂粉（15g/L）后灭菌，但是培养基都没有办法凝固，这是什么原因了。一般大家配出来的MS pH值都是多少的，我调整到5.8左右了，不知道还有哪里出现问题。
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dianaofyezi

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52187644
1楼 2011-08-17 17:13:41
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tea_gl9871 at 2011-08-18 17:20:18:
如果培养基成分没问题的话，我建议微波煮培养基时搅拌均匀。另外，高压灭菌锅的压力看看是否正常。

谢谢你的意见。
培养基是买的现成的，直接加水溶解就能用的，成分没有问题。这里您提到需要用微波煮培养基，这个步骤是在灭菌之前完成是吧？因为我原来不是学这块的，实际操作上比较匮乏，问的问题比较低级，见谅。另外一般高压灭菌时间是多长时间呢？
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52187644
5楼2011-08-19 08:27:18
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
bluekinghuang(金币+5): 也有可能不同批次的琼脂性能不稳定 2011-08-17 18:55:45
dianaofyezi(金币+2): 谢谢你的中肯建议。我再试试看。 2011-08-17 19:23:27
1.5%的琼脂浓度很高了，我是用的0.7%。不凝的原因可能有：
1、琼脂的生产厂家和批号很多，换一种试试，也许前一种偷工减料了呢？
2、灭菌的过程是否加热均匀，很多灭菌锅灭完后，琼脂还集中在底部，分为2层，这种就得趁热把它摇匀融化，不然再灭一次也不见得凝固。
3、MS一般要加糖作为碳源，一般含糖量2%的MS灭完菌以后pH值会下降约0.2，所以我一般是调pH到6.0正负0.1.
呵呵，好运。
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How about the future？
2楼2011-08-17 18:17:02
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liucaifeng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

dianaofyezi(金币+2): 谢谢，接受这些意见，再试试看。 2011-08-17 19:30:32
dianaofyezi(金币+1): 因为不凝，所以才用这么高的浓度的。 2011-08-18 10:20:46
培养基凝不凝与PH和盐离子浓度都关，Agar的话我们一般用0.8-1.0,你用1.5已经很高了，所以肯定不是Agar的问题
所以主要是看PH浓度，我们也一般都调到5.8（注意pH计是否准确）
还有盐离子浓度,我们一般用1/2MS，2.2g/L
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3楼2011-08-17 19:24:42
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tea_gl9871

铜虫 (正式写手)
★ ★
bluekinghuang(金币+2): 讨论，发金币 2011-08-19 16:00:26
如果培养基成分没问题的话，我建议微波煮培养基时搅拌均匀。另外，高压灭菌锅的压力看看是否正常。
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4楼2011-08-18 17:20:18
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