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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

[求助] 为什么我配的MS不凝固

MS培养基加了琼脂粉(15g/L)后灭菌,但是培养基都没有办法凝固,这是什么原因了。一般大家配出来的MS pH值都是多少的,我调整到5.8左右了,不知道还有哪里出现问题。
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52187644
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
bluekinghuang(金币+5): 也有可能不同批次的琼脂性能不稳定 2011-08-17 18:55:45
dianaofyezi(金币+2): 谢谢你的中肯建议。我再试试看。 2011-08-17 19:23:27
1.5%的琼脂浓度很高了,我是用的0.7%。不凝的原因可能有:
1、琼脂的生产厂家和批号很多,换一种试试,也许前一种偷工减料了呢?
2、灭菌的过程是否加热均匀,很多灭菌锅灭完后,琼脂还集中在底部,分为2层,这种就得趁热把它摇匀融化,不然再灭一次也不见得凝固。
3、MS一般要加糖作为碳源,一般含糖量2%的MS灭完菌以后pH值会下降约0.2,所以我一般是调pH到6.0正负0.1.
呵呵,好运。
How about the future?
2楼2011-08-17 18:17:02
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liucaifeng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

dianaofyezi(金币+2): 谢谢,接受这些意见,再试试看。 2011-08-17 19:30:32
dianaofyezi(金币+1): 因为不凝,所以才用这么高的浓度的。 2011-08-18 10:20:46
培养基凝不凝与PH和盐离子浓度都关,Agar的话我们一般用0.8-1.0,你用1.5已经很高了,所以肯定不是Agar的问题
所以主要是看PH浓度,我们也一般都调到5.8(注意pH计是否准确)
还有盐离子浓度,我们一般用1/2MS,2.2g/L
3楼2011-08-17 19:24:42
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tea_gl9871

铜虫 (正式写手)

★ ★
bluekinghuang(金币+2): 讨论,发金币 2011-08-19 16:00:26
如果培养基成分没问题的话,我建议微波煮培养基时搅拌均匀。另外,高压灭菌锅的压力看看是否正常。
4楼2011-08-18 17:20:18
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tea_gl9871 at 2011-08-18 17:20:18:
如果培养基成分没问题的话,我建议微波煮培养基时搅拌均匀。另外,高压灭菌锅的压力看看是否正常。

谢谢你的意见。
培养基是买的现成的,直接加水溶解就能用的,成分没有问题。这里您提到需要用微波煮培养基,这个步骤是在灭菌之前完成是吧?因为我原来不是学这块的,实际操作上比较匮乏,问的问题比较低级,见谅。另外一般高压灭菌时间是多长时间呢?
52187644
5楼2011-08-19 08:27:18
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tea_gl9871

铜虫 (正式写手)


xiaohouo0(金币+1): 越来越详细了! 2011-08-19 17:48:14
引用回帖:
5楼: Originally posted by dianaofyezi at 2011-08-19 08:27:18:
谢谢你的意见。
培养基是买的现成的,直接加水溶解就能用的,成分没有问题。这里您提到需要用微波煮培养基,这个步骤是在灭菌之前完成是吧?因为我原来不是学这块的,实际操作上比较匮乏,问的问题比较低级,见 ...

我们实验室习惯在高压灭菌之前把琼脂糖都配在培养基里,用微波炉加热使其沸腾充分溶解然后分装灭菌。灭菌是121度,时间看灭菌锅性能,一般20分钟左右。
6楼2011-08-19 08:39:20
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
我在按照你的方案做,不过金币都送完了。以后有了补给你。
52187644
7楼2011-08-19 20:53:40
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

感谢楼上各位的教导,特来汇报结果,我的MS能够凝固了,多谢各位的指导。可能因为琼脂粉的质量问题,透明度不是很好,所以先用用看,如果还是没有改善就换结冷胶了。再次感谢。
52187644
8楼2011-08-20 11:29:15
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w2boluo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dianaofyezi at 2011-08-20 11:29:15:
感谢楼上各位的教导,特来汇报结果,我的MS能够凝固了,多谢各位的指导。可能因为琼脂粉的质量问题,透明度不是很好,所以先用用看,如果还是没有改善就换结冷胶了。再次感谢。

颜色偏黄么。你的琼脂用太多了,要降到1%以下透明度才好点。
How about the future?
9楼2011-08-20 11:34:34
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by w2boluo at 2011-08-20 11:34:34:
颜色偏黄么。你的琼脂用太多了,要降到1%以下透明度才好点。

1%会不会太软了,这个我没有试过呢,我按照师兄的方法给的是1.2%。还有加到1.5%的,我怕太硬了,所以挑了一个中间的。
52187644
10楼2011-08-20 11:39:51
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