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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 切胶纯化
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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1楼 2011-08-15 09:27:45
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wzqno

金虫 (小有名气)
楼主有没有用LA taq酶做过啊，做完之后可以直接做TA克隆的，保真性也很好的，或者楼主要是对你做的东西很有信心的话，可以不做电泳回收，直接把几管PCR产物过一个胶回收柱子，然后直接做TA克隆试试。
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12楼2011-08-31 09:13:52
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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2楼2011-08-15 09:29:08
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 是滴 2011-08-15 11:19:04
madengyu(金币+2): 2011-08-15 12:06:37
高保真酶的反应做到特异性这么好已经难能可贵了。任何时候只要电泳看的见都应该可以连上。可以不必浓缩直接做下一步的。
说明书有的时候害人，不必每一步都切胶纯化的，切一次胶达到上述图片效果就行了，除去加A用的taq酶和dATP之类用pcr产物纯化试剂盒就可以了。
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How about the future？
3楼2011-08-15 09:43:12
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friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励！ 2011-08-15 13:24:28
引用回帖:
1楼: Originally posted by madengyu at 2011-08-15 09:27:45:
大家好！麻烦大家帮我解决一下问题。
      我PCR用的是高保真酶，不能直接克隆T载体，又进行了加A反应。加A说明书上要求，PCR产物先切胶纯化。所以我在加A之前跑了PCR产物的电泳（见电泳图片），进行了切胶纯化 ...

我觉得你这切胶回收的效果做TA克隆应该是没问题的！祝好运！
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4楼2011-08-15 09:51:24
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