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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 切胶纯化
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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1楼 2011-08-15 09:27:45
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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2楼2011-08-15 09:29:08
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 是滴 2011-08-15 11:19:04
madengyu(金币+2): 2011-08-15 12:06:37
高保真酶的反应做到特异性这么好已经难能可贵了。任何时候只要电泳看的见都应该可以连上。可以不必浓缩直接做下一步的。
说明书有的时候害人，不必每一步都切胶纯化的，切一次胶达到上述图片效果就行了，除去加A用的taq酶和dATP之类用pcr产物纯化试剂盒就可以了。
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How about the future？
3楼2011-08-15 09:43:12
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friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励！ 2011-08-15 13:24:28
引用回帖:
1楼: Originally posted by madengyu at 2011-08-15 09:27:45:
大家好！麻烦大家帮我解决一下问题。
      我PCR用的是高保真酶，不能直接克隆T载体，又进行了加A反应。加A说明书上要求，PCR产物先切胶纯化。所以我在加A之前跑了PCR产物的电泳（见电泳图片），进行了切胶纯化 ...

我觉得你这切胶回收的效果做TA克隆应该是没问题的！祝好运！
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4楼2011-08-15 09:51:24
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 感谢回帖交流 2011-08-15 13:24:38
楼主为何不用Blunt载体转化呢？
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jiayoubashaonian
5楼2011-08-15 10:12:55
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-08-15 13:07:13
一般不需要
直接连接，转化就可以。想想你能看见的时候，得有多少分子啊，每个分子理论上能转化一个菌，而你最少只需要一个正确的克隆就可以进行试验了啊
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6楼2011-08-15 12:58:35
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gwbk

木虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 实际经验很重要 2011-08-16 11:51:32
不管电泳跑的好不好，先往下做试试，理论和实际有差距的，甚至相反。
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7楼2011-08-15 23:26:13
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瓶儿花

金虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-30 18:43:07
可以做TA克隆了，用PCR产物纯化试剂盒纯化也OK的，T载体连接的效率很高的。
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8楼2011-08-30 14:12:12
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lingxingcao

新虫 (小有名气)
楼主，请问你的上样量是多少ul啊？
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9楼2011-08-30 16:42:48
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未知树

木虫 (著名写手)
这个效果挺好的了， 直接做连接吧。 T载体都很OK的
祝好运~
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每一天都是一个新的起点
10楼2011-08-30 22:07:37
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