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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳,跑的条带有点难看

这个是我酶切之后跑的电泳图,除了Marker和一个PCR的产物跑的条带是直线型的,怎么其他酶切的都好像跑的稍微有点快了??呈现那种所谓的微笑状,请各位虫虫帮忙分析一下原因。缓冲液?胶?还是本身质粒没有提好???
底下的小片段是目的条带,大小应该和PCR的产物是一样的大小,但是从图片上看的话就是要小一些。
之前因为RNA酶的问题,所以最近的几次提质粒都没有进行消化,图片有点难看,望各位见谅!!
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yesucao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2011-08-13 22:57:44:
原因分析:
1、胶不匀称。胶不匀称自然就要出现不规则图形。但从上图看N多都是月牙形,所以我感觉不大可能是胶不匀称。
2、电压不稳。电压不稳,会对质粒的牵引力发生扭曲。自然也要不规则。可以加大电压解决问 ...

槽子和变压器不配套,增加电压是不大可能了,不过我也是想着换一下缓冲液试一下的
12楼2011-08-13 23:09:32
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

1949stone: 恐怕不是 2011-08-13 20:14:17
yesucao(金币+1): 2011-08-13 22:47:10
微笑型条带是因为凝胶不均匀导致的哦,你看看是否药品失效,如凝胶催化剂,或者是你实验室温度太低了
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
2楼2011-08-13 19:33:00
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yesucao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 416114799 at 2011-08-13 19:33:00:
微笑型条带是因为凝胶不均匀导致的哦,你看看是否药品失效,如凝胶催化剂,或者是你实验室温度太低了

如果按你所说的话,那除了PCR的产物,Marker,还有一个酶切的也是挺好的,只有最上面的一条带,也是直线型的,是否可以排除凝胶不均匀的情况???
凝胶的时间在30-40min。
实验室的小槽子坏了,我用的是28cm的大槽子,电压只能在75左右,电流在100mA,跑了1.5h,这个是否会成为可能的潜在因素???
3楼2011-08-13 20:25:20
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4, MolEPI+1): 鼓励应助 2011-08-13 21:29:51
yesucao(金币+4): 说的有道理,今后我会注意的 2011-08-13 22:49:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by yesucao at 2011-08-13 20:25:20:
如果按你所说的话,那除了PCR的产物,Marker,还有一个酶切的也是挺好的,只有最上面的一条带,也是直线型的,是否可以排除凝胶不均匀的情况???
凝胶的时间在30-40min。
实验室的小槽子坏了,我用的是28cm的 ...

按理你其他都不会,那与电压也无关啊,要是电压有关系,全都这样了,这个更说不过去,不过你的电压也太小了,一般要在120以上,150以下会比较好。
我看你基本都是笑脸,这个与样品基本上没关系了,我还是认为与配胶有关。
另外,你拔梳子时也要注意,如果加样孔不规整,或梳子不干净引入了脏东西也是有可能的,你可以把梳子洗干净些,然后拔时快点,毕竟是DNA电泳,胶不平整我觉得很正常,如SDS电泳竖直的,有卡板,就比较少见。
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
4楼2011-08-13 20:41:57
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