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shuihaizi

金虫 (小有名气)

[交流] 做一个克隆所需的最短时间？比比谁更高效快速！

克隆一个基因：
第一天：小体系PCR（上午）-大体系回收（下午）-小样酶切-大体系酶切回收（包括载体）（晚上）-连接
第二天：早晨转化-晚上摇菌
第三天：PCR鉴定和提质粒酶切鉴定（上午提，下午鉴定）
一切顺利的情况下，紧忙乎，有没有更快更更高效的体系啊？
求交流！
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1楼 2011-08-09 22:09:15
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邓远洪dyh

新虫 (小有名气)
★
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shuihaizi(金币+1): 3 2011-08-15 16:33:51
直接大体系PCR2小时，40分钟电泳检测，10分钟过柱回收PCR产物，40分钟回收产物检测，1小时连接（亚克隆连接时间适当加长）。半小时转化（亚克隆，冰浴时间适当延长），5分钟涂板，十小时挑斑于试管，八小时后提质粒，一小时酶切和pcr检测，30分钟电泳检测。完工。总用时不到一天
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21楼2011-08-15 15:13:18
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cloverplm

金虫 (小有名气)
★
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shuihaizi(金币+1): 2011-08-10 16:33:51
哎，一般都是这个样子的啦，公司效率会高一点，因为有很多机器，很多Items可以同时做。
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3楼2011-08-09 22:53:26
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wzqno

金虫 (小有名气)
★
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shuihaizi(金币+1): 2011-08-10 16:34:01
基本上最快也就这速度了，你可以用NEB的内切酶，一个小时搞定酶切，稍微快点
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4楼2011-08-10 10:45:23
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3): good 2011-08-10 12:12:02
shuihaizi(金币+1): 2011-08-10 16:34:40
原先在公司做的时候时间是这么安排的：
第一天：小体系PCR（上午）-大体系回收（下午）-小样酶切-大体系酶切回收（包括载体）（晚上）-连接转化
第二天：早上摇菌，1小时候菌落PCR验证，大概中午能出菌检结果，下午可以酶切验证或测序
fermentas的普通T4连接酶，我22℃连半个小时足够了，所以晚上连接转化可以一起做。
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6楼2011-08-10 11:37:07
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