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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 全血样品怎么制备？？
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良善

金虫 (小有名气)

[求助] 全血样品怎么制备？？

急求全血样品的制备方法？还请各位大虾帮忙啊！
小弟做的药，血浆中含量是在太低，换了好多种萃取溶剂，加大了给药剂量，灌胃后的血浆中仍是测不到，所以考虑换全血来测。但是文献都写的很模糊，体内药物分析书上也没有具体说如何制备。
现在又如下疑问：
1. 是不是全血样品一定要经过细胞破碎？破碎时，都可以使用何种方法进行破碎？
2. 见到又文献提到超声30min，是不是指的就是超声细胞破碎仪？不知道使用超声清洗仪行不行？
3. 另外，全血样品是不是在取血后血药马上进行样品处理，直接冻存可以么？冻存以后，下次使用前有何注意事项没有啊？

求各位大虾，各位神仙帮小弟解惑啊~！
谢谢啦！！！
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1楼2011-08-08 18:49:28
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陈林霖

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
良善(金币+30): 很好，很强大。 2011-08-09 10:01:58
qinhy(金币+1): 多谢应助回帖~ 2011-08-16 18:47:15
先弄清楚药物血浆含量低的原因再决定是否用全血样品，因为如果药物都在红细胞内不释放出来是不能产生药效的，如果一定要用：
1. 全血样品要破红细胞，不然用血浆样品就行了。破碎方法有好几种，能导致溶血的条件都可以，如冷冻，超声，加热等。
2. 没用过超声仪破碎，不知能否完全破碎
3. 全血冷冻后红细胞直接就破裂了
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2楼2011-08-08 19:10:10
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zhongyun8668

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
良善(金币+20): 谢谢啦！ 2011-08-09 10:02:13
qinhy(金币+1): 多谢应助回帖~ 2011-08-16 18:47:23
1、是化药，而不是其它的什么中药或生物药吧；
2、灌胃给药是否有考虑过肝的首过效应；
3、请先确定你的药物的作用靶点是什么；
4、作用靶点如果不是血细胞，那破碎血细胞的目的何在；
5、药物半衰期大致是多少，取血时间点是否合理；
6、检测血药浓度的方法是什么，是否合适，灵敏度如何；
7、是否还有别的方法来检测血药浓度；
8、有没有考虑过人为因素的失误所造成的结果；
9、是否考虑将此实验外包给别的专业实验室，科研单位或CRO公司来进行。
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花开花落自有时
3楼2011-08-09 09:41:50
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良善

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈林霖 at 2011-08-08 19:10:10:
先弄清楚药物血浆含量低的原因再决定是否用全血样品，因为如果药物都在红细胞内不释放出来是不能产生药效的，如果一定要用：
1. 全血样品要破红细胞，不然用血浆样品就行了。破碎方法有好几种，能导致溶血的条件 ...

首先，我这个药物对血细胞有作用，可以用来治疗粒细胞白血病。所以我觉得应该破碎血细胞。而且，此药水溶性很差，在血浆中含量很低，有报道称其大量聚集在血细胞中。
冷冻是个不错的办法，我打算试试。但是，我也听人说全血经过冷冻就会分层了。上面是血浆，下面是红细胞之类的。不知道用的时候有什么注意事项啊？
还请大虾帮忙解答哈~！小弟这里万分感谢啦！！
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4楼2011-08-09 09:53:47
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良善

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhongyun8668 at 2011-08-09 09:41:50:
1、是化药，而不是其它的什么中药或生物药吧；
2、灌胃给药是否有考虑过肝的首过效应；
3、请先确定你的药物的作用靶点是什么；
4、作用靶点如果不是血细胞，那破碎血细胞的目的何在；
5、药物半衰期大致是多 ...

我做的是中药提取物，不过含量在90%以上，算是单体。可以用来治疗粒细胞白血病，并且水溶性很差，综合以上两点我觉得应该破碎血细胞。
至于其他的小弟还在摸索，之前也多次做过血管外给药的药动学，所以对其他部分的实验设计还有把握。只是全血是第一次接触，毫无头绪，不知该如何制备全血样品。
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5楼2011-08-09 10:01:03
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lofour

木虫 (小有名气)
★
karl2100(金币+1): 多谢提供！ 2011-08-09 23:00:51
在全血中加入2-3倍体积的水可以使血细胞破裂，这方法不错，CRO公司教的，呵呵。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

良善
6楼2011-08-09 20:04:11
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良善

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by lofour at 2011-08-09 20:04:11:
在全血中加入2-3倍体积的水可以使血细胞破裂，这方法不错，CRO公司教的，呵呵。

加水不就把血液中的药物稀释了么？我直接加5倍量的乙酸乙酯萃取，是不是就直接就起到破碎红细胞的作用了？
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7楼2011-08-10 09:57:25
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lofour

木虫 (小有名气)
全血统一处理，把稀释倍数折算回去，就可以了。
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8楼2011-08-12 13:33:49
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良善

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lofour at 2011-08-12 13:33:49:
全血统一处理，把稀释倍数折算回去，就可以了。

但是，那我用来萃取的溶剂是不是就需要相对增多了？比如说，正常我用400微升全血，那就需要加800-1200微升水，是这么个意思么？
正常情况下，我用2-3毫升乙酸乙酯萃取，那在加水后我需不需要增加乙酸乙酯的用量？
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9楼2011-08-12 17:28:24
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kkbyb

木虫 (著名写手)
他浓度本来就低，加水溶破红细胞的话，如果细胞内的量远大于稀释带来的降低还好，如果不能，还是超声震碎吧
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10楼2011-08-16 13:25:40
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