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良善

金虫 (小有名气)

[求助] 全血样品怎么制备??

急求全血样品的制备方法?还请各位大虾帮忙啊!
小弟做的药,血浆中含量是在太低,换了好多种萃取溶剂,加大了给药剂量,灌胃后的血浆中仍是测不到,所以考虑换全血来测。但是文献都写的很模糊,体内药物分析书上也没有具体说如何制备。
现在又如下疑问:
1. 是不是全血样品一定要经过细胞破碎?破碎时,都可以使用何种方法进行破碎?
2. 见到又文献提到超声30min,是不是指的就是超声细胞破碎仪?不知道使用超声清洗仪行不行?
3. 另外,全血样品是不是在取血后血药马上进行样品处理,直接冻存可以么?冻存以后,下次使用前有何注意事项没有啊?

求各位大虾,各位神仙帮小弟解惑啊~!
谢谢啦!!!
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陈林霖

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


良善(金币+30): 很好,很强大。 2011-08-09 10:01:58
qinhy(金币+1): 多谢应助回帖~ 2011-08-16 18:47:15
先弄清楚药物血浆含量低的原因再决定是否用全血样品,因为如果药物都在红细胞内不释放出来是不能产生药效的,如果一定要用:
1. 全血样品要破红细胞,不然用血浆样品就行了。破碎方法有好几种,能导致溶血的条件都可以,如冷冻,超声,加热等。
2. 没用过超声仪破碎,不知能否完全破碎
3. 全血冷冻后红细胞直接就破裂了
2楼2011-08-08 19:10:10
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zhongyun8668

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


良善(金币+20): 谢谢啦! 2011-08-09 10:02:13
qinhy(金币+1): 多谢应助回帖~ 2011-08-16 18:47:23
1、是化药,而不是其它的什么中药或生物药吧;
2、灌胃给药是否有考虑过肝的首过效应;
3、请先确定你的药物的作用靶点是什么;
4、作用靶点如果不是血细胞,那破碎血细胞的目的何在;
5、药物半衰期大致是多少,取血时间点是否合理;
6、检测血药浓度的方法是什么,是否合适,灵敏度如何;
7、是否还有别的方法来检测血药浓度;
8、有没有考虑过人为因素的失误所造成的结果;
9、是否考虑将此实验外包给别的专业实验室,科研单位或CRO公司来进行。
花开花落自有时
3楼2011-08-09 09:41:50
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良善

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈林霖 at 2011-08-08 19:10:10:
先弄清楚药物血浆含量低的原因再决定是否用全血样品,因为如果药物都在红细胞内不释放出来是不能产生药效的,如果一定要用:
1. 全血样品要破红细胞,不然用血浆样品就行了。破碎方法有好几种,能导致溶血的条件 ...

首先,我这个药物对血细胞有作用,可以用来治疗粒细胞白血病。所以我觉得应该破碎血细胞。而且,此药水溶性很差,在血浆中含量很低,有报道称其大量聚集在血细胞中。
冷冻是个不错的办法,我打算试试。但是,我也听人说全血经过冷冻就会分层了。上面是血浆,下面是红细胞之类的。不知道用的时候有什么注意事项啊?
还请大虾帮忙解答哈~!小弟这里万分感谢啦!!
4楼2011-08-09 09:53:47
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良善

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhongyun8668 at 2011-08-09 09:41:50:
1、是化药,而不是其它的什么中药或生物药吧;
2、灌胃给药是否有考虑过肝的首过效应;
3、请先确定你的药物的作用靶点是什么;
4、作用靶点如果不是血细胞,那破碎血细胞的目的何在;
5、药物半衰期大致是多 ...

我做的是中药提取物,不过含量在90%以上,算是单体。可以用来治疗粒细胞白血病,并且水溶性很差,综合以上两点我觉得应该破碎血细胞。
至于其他的小弟还在摸索,之前也多次做过血管外给药的药动学,所以对其他部分的实验设计还有把握。只是全血是第一次接触,毫无头绪,不知该如何制备全血样品。
5楼2011-08-09 10:01:03
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lofour

木虫 (小有名气)


karl2100(金币+1): 多谢提供! 2011-08-09 23:00:51
在全血中加入2-3倍体积的水可以使血细胞破裂,这方法不错,CRO公司教的,呵呵。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2011-08-09 20:04:11
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良善

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by lofour at 2011-08-09 20:04:11:
在全血中加入2-3倍体积的水可以使血细胞破裂,这方法不错,CRO公司教的,呵呵。

加水不就把血液中的药物稀释了么?我直接加5倍量的乙酸乙酯萃取,是不是就直接就起到破碎红细胞的作用了?
7楼2011-08-10 09:57:25
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lofour

木虫 (小有名气)

全血统一处理,把稀释倍数折算回去,就可以了。
8楼2011-08-12 13:33:49
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良善

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lofour at 2011-08-12 13:33:49:
全血统一处理,把稀释倍数折算回去,就可以了。

但是,那我用来萃取的溶剂是不是就需要相对增多了?比如说,正常我用400微升全血,那就需要加800-1200微升水,是这么个意思么?
正常情况下,我用2-3毫升乙酸乙酯萃取,那在加水后我需不需要增加乙酸乙酯的用量?
9楼2011-08-12 17:28:24
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kkbyb

木虫 (著名写手)

他浓度本来就低,加水溶破红细胞的话,如果细胞内的量远大于稀释带来的降低还好,如果不能,还是超声震碎吧
10楼2011-08-16 13:25:40
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