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jian520yi

木虫 (正式写手)

[求助] 一个合成的约40bp的片段怎么引入载体?

如题,我需要在载体中加入一个纯化标签,标签两边酶切位点和载体一样,但标签是合成的小片段,40bp,怎么做?就用合成片段来扩增吗? 麻烦高手指点!
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jian520yi

木虫 (正式写手)

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2楼: Originally posted by shaquila at 2011-08-04 19:08:59:
你合成的是双链,还是用两条引物退火而成
http://edu.muchong.com/attachment/9c/48/654839_1299721150_644.jpg
可以利用两个引物退火形成带粘端小片段,然后和载体连接

我还是有很多地方感觉不清楚,比如合成约25bpy引物,后面是用类似PCR的方法使其扩增?那酶,DNTP什么的要怎么解决?这么小怎么纯化?连接也会比较难呀。
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3楼2011-08-05 09:39:26
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jian520yi

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shaquila at 2011-08-05 10:26:17:
不要扩增直接退火啊,你合成的引物浓度很高的,不用PCR扩增的

有没有这个具体方法的文献或文章,技术路线什么的?
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5楼2011-08-05 10:59:14
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jian520yi

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-05 14:04:38:
1.如果你合成的是两条单链,那么直接退火后就可以连接载体了,不过我现在很怀疑你的酶切位点处的序列设计的是否正确。如果可以把两条序列和酶切位点的名字传上来吧
2.如果你合成的是双链DNA,请确定你的酶切位点 ...

我直接不用保护碱基,就是用酶切位点直接连载体,否则酶切还要处理很麻烦!给我留个邮箱吧,好交流些!
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7楼2011-08-05 14:39:18
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