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shaquila

金虫 (正式写手)

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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2, BioEPI+1): 首次说明小片段链接，对新手很有参考意义！感谢您的分享，祝顺利！ 2011-08-05 19:27:49

引用回帖:

5楼: Originally posted by jian520yi at 2011-08-05 10:59:14:
有没有这个具体方法的文献或文章，技术路线什么的？

技术路线很简单，引物回来稀释成100pmol/ul
两条各取2ul混匀成4ul，95度变性5min，慢退火（PCR 95度反应后直接停止关机，30分钟后拿出来放在室温）

连接体系就是4ul小片段＋载体（能达到300ng最好）＋T4bufffer&ligase
连接反应过夜～～

做了两次，一次是平端补平加酶切位点，一次是加his-tag，都成功了，只要小片段的酶切位点别设计错了就ok～

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8楼2011-08-05 16:28:23

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