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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2, BioEPI+1): 首次说明小片段链接,对新手很有参考意义!感谢您的分享,祝顺利! 2011-08-05 19:27:49
引用回帖:
5楼: Originally posted by jian520yi at 2011-08-05 10:59:14:
有没有这个具体方法的文献或文章,技术路线什么的?

技术路线很简单,引物回来稀释成100pmol/ul
两条各取2ul混匀成4ul,95度变性5min,慢退火(PCR 95度反应后直接停止关机,30分钟后拿出来放在室温)

连接体系就是4ul小片段+载体(能达到300ng最好)+T4bufffer&ligase
连接反应过夜~~

做了两次,一次是平端补平加酶切位点,一次是加his-tag,都成功了,只要小片段的酶切位点别设计错了就ok~
8楼2011-08-05 16:28:23
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