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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提不出质粒，不知道出了什么问题，求助……
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by vickie20 at 2011-08-04 19:34:45:
但是超螺旋啊开环啊的位置都应该在线性的下面吧？也就是说应该是在目的位置的下面吧？

质粒理论上是可以三种形式存在着，但实际跑胶时能看到一到三条带都是正常的，并且如果质粒提的质量很好，基本上都是超螺旋的，所以要确定质粒的大小，只有酶切后才能知道
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11楼2011-08-04 23:07:13
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 辛苦 2011-08-05 10:45:04
看电泳图，这应该是载体，楼主是想提取重组载体进行验证吧，重新进行提取吧，如果按照你的信息，提取出来的载体应该比线性化的小很多，可是出来居然在5000bp以上，最好做一个双酶切，毕竟marker只是表征线性载体的一个标准，只有将载体线性化才具有说服性；
个人建议：重新提取质粒，把胶配的好一些，你上面那张图marker都跑成那样子了，所以胶有点问题；
                提取出来的载体点样的时候可以加一个空载体进行对照，因为你重组载体连接了一个基因片段，按照楼主所说的长度，那么重组载体应该比空载体大一些；
                进行一个双酶切，然后点样看看，点样的时候带上你当时进行酶切的空载体和酶切的基因作为对照，如果大小一致，那么恭喜你，对了；

加油！祝实验顺利！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
12楼2011-08-05 10:21:41
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longage.gene

银虫 (小有名气)
酶切结果如何？双酶切？单酶切？切记，这种情况下，单双都切最好。
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13楼2011-08-05 10:43:19
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vickie20

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 天使托 at 2011-08-05 10:21:41:
看电泳图，这应该是载体，楼主是想提取重组载体进行验证吧，重新进行提取吧，如果按照你的信息，提取出来的载体应该比线性化的小很多，可是出来居然在5000bp以上，最好做一个双酶切，毕竟marker只是表征线性载体的 ...

谢谢~~~
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14楼2011-08-05 13:33:41
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vickie20

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by longage.gene at 2011-08-05 10:43:19:
酶切结果如何？双酶切？单酶切？切记，这种情况下，单双都切最好。

不好意思，目前还没做酶切
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15楼2011-08-05 13:34:14
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quiller2000

木虫 (著名写手)
切一下定吧，坦率的说，用marker来确定质粒的大小是不合适的，何况质粒根本就不是我们想象的那么乖！
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致良知
16楼2011-08-05 15:21:54
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vickie20

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-08-05 15:21:54:
切一下定吧，坦率的说，用marker来确定质粒的大小是不合适的，何况质粒根本就不是我们想象的那么乖！

嗯，用marker判断大小是不合适，但是超螺旋和开环的位置应该是在线性的下面吧，那就是说超螺旋和开环的带的位置是低于约4500的吧？
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17楼2011-08-05 15:37:54
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kenan8848

新虫 (小有名气)
这个应该是提出来了，我也遇到类似情况，用MARKER对照质粒确实不靠谱。拿个别人提出的质粒对照看看。
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真相只有一个
18楼2012-02-09 23:13:40
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