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wxy1234yyf金虫 (小有名气)
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| 各位师兄师姐，实验中遇到个诡异的问题想请教下：目的基因连T载体，PCR带很亮，酶切检验却看不到条带，连质粒都看不到，怎么回事呢？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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zlu520
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2楼2011-07-22 17:43:20
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+4, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-22 19:15:47
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+4, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-22 19:15:47
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楼主说的太不明确了，PCR条带很亮是指做PCR验证的时候吗？还是你原来连接之前PCR目的基因很亮呢？ 你有没有提取重组质粒呢？ 一般验证连接的话： 1：先做一个PCR，如果可以P出来，那么很有可能就对了； 2：然后提取重组质粒，电泳验证，点样的时候可以顺便点一个空载体当对照，如果重组载体比空载体大一点的话，那就对了，当然了，这个取决于目的基因的大小了，如果是几十bp或者是100bp等小片段的话，就不太好看出来了，此时就需要进行一个酶切验证了； 3：酶切重组载体，照楼主所说，你酶切看不到条带，首先保证你重组质粒提取出来了，其次有可能是你酶切体系太小了，导致看不到；当然了胶也有可能有问题的； 祝好运！ |
3楼2011-07-22 18:48:55
wxy1234yyf
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4楼2011-07-22 19:03:33
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5楼2011-07-22 20:23:38