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wxy1234yyf

金虫 (小有名气)

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[交流] 一个问题已有3人参与

各位师兄师姐，实验中遇到个诡异的问题想请教下：目的基因连T载体，PCR带很亮，酶切检验却看不到条带，连质粒都看不到，怎么回事呢？

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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-07-22 17:10:50

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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人

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如果你能确定目的基因连接到载体上，有可能酶切时或则电泳过程出现问题了。。。。dna降解了。。。

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无完人！

2楼2011-07-22 17:43:20

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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

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amisking(金币+4, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-22 19:15:47

楼主说的太不明确了，PCR条带很亮是指做PCR验证的时候吗？还是你原来连接之前PCR目的基因很亮呢？

你有没有提取重组质粒呢？
一般验证连接的话：
1：先做一个PCR，如果可以P出来，那么很有可能就对了；
2：然后提取重组质粒，电泳验证，点样的时候可以顺便点一个空载体当对照，如果重组载体比空载体大一点的话，那就对了，当然了，这个取决于目的基因的大小了，如果是几十bp或者是100bp等小片段的话，就不太好看出来了，此时就需要进行一个酶切验证了；
3：酶切重组载体，照楼主所说，你酶切看不到条带，首先保证你重组质粒提取出来了，其次有可能是你酶切体系太小了，导致看不到；当然了胶也有可能有问题的；

祝好运！

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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!

3楼2011-07-22 18:48:55

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