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bdchengli木虫 (小有名气)
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[求助]
切口酶用量问题
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| 我的实验设计是在发卡结构的分子信标上设计了两个酶切位点，为什么我的切口酶用量要非常大才能出现象，是以前用量的4倍甚至更多 |
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 Aptamer_Biosensor | 【分子生物】EPI帖 |
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2楼2011-07-22 10:43:13
bdchengli
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4楼2011-07-22 11:03:56
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！ 2011-07-22 16:53:25
西瓜(金币+4): Good！ 2011-07-22 16:53:25
| 影响酶切活性的因素有许多，概略的说可分为外因和内因。外因是可预见和控制的，如反应条件、底物的纯度（是否有杂质、是否有盐酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当、反应体积的选择以及反应时间的长短等等。内因包括位点偏爱性、甲基化底物、底物的构象。构象的影响主要指切割线性 DNA 和超螺旋 DNA 时的活性，如与切割 lDNA 相比， EcoRⅠ、PstⅠ、SalⅠ 需要至少 2.5-10 倍的酶来切割 pBR322 的超螺旋 DNA 。 PaeRTⅠ 与 XhoⅠ 切割相同的序列（C↓TCGAG），但如果 5' 端为 CT 则 PaeRTⅠ 不能切割。 |
5楼2011-07-22 12:38:35
bdchengli
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