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bdchengli

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[求助] 切口酶用量问题

我的实验设计是在发卡结构的分子信标上设计了两个酶切位点，为什么我的切口酶用量要非常大才能出现象，是以前用量的4倍甚至更多

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1楼 2011-07-22 10:30:38

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bdchengli

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引用回帖:

Originally posted by zlu520 at 2011-07-22 11:03:56:
酶活可能降低了。。。

换过新的酶了，还是那样

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6楼2011-07-22 15:54:23

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空谷幽风

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 个别酶的活力定义不一样，楼主还需看说明书。 2011-07-22 12:03:36
bdchengli(金币+5): 2011-07-22 15:55:31

内切酶的一般用量是1ul酶切大约1ugDNA，当然有些时候需要加大酶的用量：
（1）如果DNA内含有多个你所要酶切的酶切位点，那么你需要加大用量（道理很简单，不用解释）
（2）双酶切时一种酶在公用buffer里面活性在80%一下
（3）经以前验证，这种酶较其他酶活性低的，一般不常用的酶（稀缺一点的）会出现这种情况

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