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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体现在哪里？
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墨池

银虫 (小有名气)

[求助] 非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体现在哪里？已有1人参与

1  非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体现在哪里？
2  SRAP标记用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，是变性还是非变性？配方是什么？配胶时，过硫酸铵是不是要最后加入？

谢谢(*^__^*) 嘻嘻
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1楼2011-07-21 20:57:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
墨池(金币+1): 2011-07-21 21:52:46
dhd997(金币+3): good 2011-07-22 08:17:27
西瓜(金币+2, EPI+1): 砖家啊 2011-07-22 12:16:20
1. 变性胶加尿素或者其他变性剂，非变性胶是不加的。一般做RNA分离或回收、蛋白质分子量测定会使用变性PAGE，而DNA跑PAGE通常是采用非变性PAGE，另外回收活性蛋白也有用非变性PAGE的。
2. SRAP（貌似叫什么...相关序列扩增多态性）标记这个应该是非变性PAGE，6%的PAGE胶配方就不用发了吧，google一下一大堆。TEMED和过硫酸铵都是最后加，混匀后再灌胶。
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2楼2011-07-21 21:16:21
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changes

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
墨池(金币+1): 2011-07-21 21:54:07
dhd997(金币+3): good 2011-07-22 08:17:40
西瓜(金币+5, EPI+1): 很详细 2011-07-22 12:16:44
引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 20:57:19:
1  非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体现在哪里？
2  SRAP标记用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，是变性还是非变性？配方是什么？配胶时，过硫酸铵是不是要最后加入？

谢谢(*^__^*) 嘻嘻

1. “变性”体现在聚丙烯酰胺凝胶中加入尿素(一般跑DNA)或SDS(一般跑蛋白)，另外，如果样品也要变性(DNA的loanding buffer也与普通的琼脂糖电泳所用的不同，同理所用Marker也不同；蛋白也要变性)。
2.SRAP一般用变性的聚丙烯酰胺，毕竟片段还是比较小。
3.配胶时不用加入过硫酸铵，灌胶前同时加入过硫酸铵(注意有毒！低温保存)和TEMED（也有毒，特臭）。

另外，这些问题貌似分子克隆那本书非常详细，只不过SRAP标记较新而已，没有收录，但是检测方法是通用的。请多多看书，祝实验好运！
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5楼2011-07-21 21:44:07
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普通回帖

墨池

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-07-21 21:16:21:
1. 变性胶加尿素或者其他变性剂，非变性胶是不加的。一般做RNA分离或回收、蛋白质分子量测定会使用变性PAGE，而DNA跑PAGE通常是采用非变性PAGE，另外回收活性蛋白也有用非变性PAGE的。
2. SRAP（貌似叫什么...相 ...

TEMED和过硫酸铵的先后呢？
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3楼2011-07-21 21:19:38
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todouhy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
墨池(金币+1): 2011-07-21 21:53:09
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-22 12:16:59
引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 21:19:38:
TEMED和过硫酸铵的先后呢？

最后加APS,也就是过硫酸铵，变性就是用缓冲液中加了SDS
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4楼2011-07-21 21:28:48
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墨池

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by changes at 2011-07-21 21:44:07:
1. “变性”体现在聚丙烯酰胺凝胶中加入尿素(一般跑DNA)或SDS(一般跑蛋白)，另外，如果样品也要变性(DNA的loanding buffer也与普通的琼脂糖电泳所用的不同，同理所用Marker也不同；蛋白也要变性)。
2.SRAP一般 ...

你说SRAP是变性的，我看师姐的配胶过程没有一点体现变性的物质。
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6楼2011-07-21 21:55:04
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changes

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 21:55:04:
你说SRAP是变性的，我看师姐的配胶过程没有一点体现变性的物质。

非变性胶也可以，但是分辨率会低些。另外，你是用SRAP标记做什么的，多态性还是标记目的基因或遗传图谱构建？
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7楼2011-07-21 22:05:02
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
dhd997(金币+2): 二八博士 2011-07-22 08:17:53
APS和TEMED虽然不好，但也比不上丙烯酰胺有神经毒性，可随皮肤渗入人体，所以我是什么东西都加完之后最后加丙烯酰胺。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜素论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2011-07-22 07:42:27
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-22 07:42:27:
APS和TEMED虽然不好，但也比不上丙烯酰胺有神经毒性，可随皮肤渗入人体，所以我是什么东西都加完之后最后加丙烯酰胺。

...额~~话说我们一般都是把丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺配成40%的母液，用的时候根据所需要的浓度加一定量的母液即可。要是每次都搞丙烯酰胺来配，那谁受得了啊。。。
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9楼2011-07-22 10:07:55
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-07-22 12:17:16
引用回帖:
Originally posted by changes at 2011-07-21 21:44:07:
1. “变性”体现在聚丙烯酰胺凝胶中加入尿素(一般跑DNA)或SDS(一般跑蛋白)，另外，如果样品也要变性(DNA的loanding buffer也与普通的琼脂糖电泳所用的不同，同理所用Marker也不同；蛋白也要变性)。
2.SRAP一般 ...

这个我有点问题...跑DNA的PAGE电泳要用变性胶么？根据我的经验，双链DNA跑尿素PAGE的时候由于变性导致双链打开，电泳图会非常难看，原本的单一条带会变成非常接近的两个条带。嗯，不过我这种情况是DNA片段较大（＞50bp）的时候，不知道十几个bp的DNA会怎样。so...我只用过尿素PAGE分离回收RNA的说...
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10楼2011-07-22 10:12:56
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