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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 葡萄糖标准曲线的绘制
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yangru.520

木虫 (小有名气)

[求助] 葡萄糖标准曲线的绘制

大家好！我有一问题很纠结，关于葡萄糖标准曲线的绘制方法，该曲线用于测定udpg(尿苷二磷酸葡萄糖)酶活性。UDPG的测定方法为：参照Douglus(1988)的方法:100μL 5mmol/L UDPG加50μL 50mmol/L MgCl2、缓冲液100μL、酶提取液20μL 加100μL 20mmol/L PPi开始反应，反应15min后，沸水浴1min终止反应。冷却后加100μL 6mmol/L NADP(辅酶Ⅱ)、100μL（50μL） 1.5 IU/ml磷酸葡萄糖变位酶，50μL 5（1.5）IU/ml的6-磷酸葡萄糖脱氢酶，0.3（0.9）ml缓冲液，总体积1.5ml，30℃反应5~10min后,340nm比色，用G-1-P(1-磷酸葡萄糖)做标准曲线。做葡萄糖标准曲线时，设置不同葡萄糖浓度梯度后，不同浓度的葡萄糖溶液是在100μL 6mmol/L NADP(辅酶Ⅱ)、100μL（50μL） 1.5 IU/ml磷酸葡萄糖变位酶，50μL 5（1.5）IU/ml的6-磷酸葡萄糖脱氢酶，0.3（0.9）ml缓冲液，总体积1.5ml，30℃反应5~10min后,340nm比色条件下做OD值呢？还是直接就在DNS配方条件下于540nm条件下测OD值？前一种是否有依据，我也不太清楚，望各位虾友指点指点！不胜感激！

[ Last edited by yangru.520 on 2011-7-20 at 23:12 ]
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1楼 2011-07-20 23:02:55
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斌斌1990

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-07-21 09:51:43
yangru.520(金币+1): 2011-07-22 16:22:47
应该是后者，直接在DNS配方条件下，沸水浴后于540nm条件下测OD值，因为标准曲线是葡萄糖浓度与Abs540的直接对应关系，不能加入的其他的。
赞一下(1人) 回复此楼
科研路漫漫修远，吾将实验而求索
2楼2011-07-20 23:35:12
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