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yangru.520木虫 (小有名气)
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[求助]
葡萄糖标准曲线的绘制
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大家好！我有一问题很纠结，关于葡萄糖标准曲线的绘制方法，该曲线用于测定udpg(尿苷二磷酸葡萄糖)酶活性。UDPG的测定方法为：参照Douglus(1988)的方法:100μL 5mmol/L UDPG加50μL 50mmol/L MgCl2、缓冲液100μL、酶提取液20μL 加100μL 20mmol/L PPi开始反应，反应15min后，沸水浴1min终止反应。冷却后加100μL 6mmol/L NADP(辅酶Ⅱ)、100μL（50μL） 1.5 IU/ml磷酸葡萄糖变位酶，50μL 5（1.5）IU/ml的6-磷酸葡萄糖脱氢酶，0.3（0.9）ml缓冲液，总体积1.5ml，30℃反应5~10min后,340nm比色，用G-1-P(1-磷酸葡萄糖)做标准曲线。做葡萄糖标准曲线时，设置不同葡萄糖浓度梯度后，不同浓度的葡萄糖溶液是在100μL 6mmol/L NADP(辅酶Ⅱ)、100μL（50μL） 1.5 IU/ml磷酸葡萄糖变位酶，50μL 5（1.5）IU/ml的6-磷酸葡萄糖脱氢酶，0.3（0.9）ml缓冲液，总体积1.5ml，30℃反应5~10min后,340nm比色条件下做OD值呢？还是直接就在DNS配方条件下于540nm条件下测OD值？前一种是否有依据，我也不太清楚，望各位虾友指点指点！不胜感激！ [ Last edited by yangru.520 on 2011-7-20 at 23:12 ] |
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