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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于cyt C问题
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瘪

金虫 (小有名气)

[求助] 关于cyt C问题

我现在要做cyt C 的western ，买的抗体型号是SC-13156，请问有人用这个抗体么？怎么样？我要做这个，蛋白预染marker要买多大的？就是要根据cyt C的蛋白大小而定。还有就是做cyt C一抗的稀释度是多少？请有经验的前辈高手指！！

[ Last edited by 瘪 on 2011-7-18 at 20:38 ]
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1楼2011-07-18 20:35:20
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瘪

金虫 (小有名气)
没有人知道？不会吧
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2楼2011-07-19 09:31:38
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瘪

金虫 (小有名气)
还是没人知道，顶一下~
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3楼2011-07-20 12:21:28
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
4楼2011-07-20 16:20:19
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瘪

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-20 16:20:19:

3Q~可是还是没人回答，哎~
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5楼2011-07-22 09:08:08
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瘪

金虫 (小有名气)
那我换个问题吧，这个分子量非常的小只有800多，请问做过WB的高手，这么小的分子量是不是不容易出结果，还有什么其他方法可以做这个蛋白么？又谁做过小分子量的蛋白的WB的么？
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6楼2011-07-22 09:20:05
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-26 08:38:44
Maker的选择可以看公司的产品目录，上面会有各种maker的条带大小，只要范围覆盖你的蛋白的大小就可以用了。产品目录也可以跟当地的代理商索取，他们很乐意提供的。
Western Blot我做得很少，就不误人子弟了
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7楼2011-07-22 09:28:32
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瘪

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-22 09:28:32:
Maker的选择可以看公司的产品目录，上面会有各种maker的条带大小，只要范围覆盖你的蛋白的大小就可以用了。产品目录也可以跟当地的代理商索取，他们很乐意提供的。
Western Blot我做得很少，就不误人子弟了

恩，知道了。我要做的这个蛋白分子量非常的小，据说是跑不出来的，哎~再想想其他做这个蛋白的方法吧，我是还没做过，怎么也比我强多了~谢谢，呵呵~
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8楼2011-07-22 09:49:53
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瘪

金虫 (小有名气)
dhd997: 可以通知版主处理，给几楼加分，或者退还金币 2011-07-26 08:38:29
没有人回答我的红包也给不出去难道就一直这个状态？
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9楼2011-07-26 08:08:58
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

应该用Tricine-SDS-PAGE来电泳，普通的变性胶很难分离小分子量的蛋白质；凝胶的浓度为16.5％T和3％C就差不多；最关键的一步是转移后你的PVDF膜一定要在固定液中固定，否则在经过后续处理后小分子量的蛋白质基本上被洗脱或者扩散了，我们通常是在转移完毕后，先用超纯水漂洗一下膜，然后在TBS中过渡清洗5分钟左右，然后用含0.2％戊二醛的TBS固定45分钟，再依照WB的步骤处理后面的过程，后来能得到很好的结果，否则明明蛋白转移到膜上了，后来却消失不见，更不用说免疫检测了.

转自丁香园smjxc
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寝室楼的大爷、大妈都是哲学家，他们每天都在思考人类最根本的三个问题：你是谁？你从哪儿来？要去哪儿？
10楼2011-07-26 09:03:34
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