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xiaolangzzy

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

瘪(金币+5): 2011-07-27 08:26:10

根据我的经验，细胞色素c (cyt c)的分子量约为12kd，能够通过15%的SDS-PAGE较好地分离开，但是应注意染料条带不能跑过距离胶底1/3处，而且蛋白电转的时间不能太长（我用的是PVDF膜，方法为全湿法电转，条件为350mA，2h）。
santa的抗体虽然大部分不好用，但是cyt c的抗体还是比较好用的，稀释度记不清了，应该是1:1000吧。
我当时没有用预染的Marker，你若需要的话就买中分子量范围的就可以的。关键是在预实验的时候需要同时做一个阳性对照（购买的提纯的cyt c），不同物种的cyt c是非常保守相似的，所以不用担心抗体和购买的提出cyt c不合适的问题。
希望对你有帮助，祝好运！

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11楼2011-07-26 16:03:04

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瘪

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by xiaolangzzy at 2011-07-26 16:03:04:
根据我的经验，细胞色素c (cyt c)的分子量约为12kd，能够通过15%的SDS-PAGE较好地分离开，但是应注意染料条带不能跑过距离胶底1/3处，而且蛋白电转的时间不能太长（我用的是PVDF膜，方法为全湿法电转，条件为350m ...

你好，我想请问下，那你买的是哪个公司的cyt C抗体呢？我就是在文献中查到这个抗体，我们实验室条件不大好，电泳仪和制胶装置都很老旧，所以我觉得要想出成果还是需要比较好的其他条件。

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12楼2011-07-27 08:25:58

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小损样儿

铁杆木虫 (职业作家)

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引用回帖:

Originally posted by 瘪 at 2011-07-18 20:35:20:
我现在要做cyt C 的western ，买的抗体型号是SC-13156，请问有人用这个抗体么？怎么样？我要做这个，蛋白预染marker要买多大的？就是要根据cyt C的蛋白大小而定。还有就是做cyt C一抗的稀释度是多少？请有经验的前 ...

商品化抗体一般告知大约的稀释度，例如用PAP法可1：100～1：200稀释。但往往购买到一种新抗体后，需要利用组织切片进行最佳稀释度的测定。如果有做过相关的实验的话，可以参考别人抗体的稀释度。见附件
你买marker产品通常会包含5种以上预染的已知分子量标准蛋白质，只要分子量范围包含了cyt-c就行。Cyt C 是一种水溶性的小分子蛋白质，分子量约为12 kD，所以你如果买的marker分子量范围只要包含了12kd就行。这个咨询试剂公司就可以买得到。

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13楼2011-07-27 10:24:01

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