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瘪

金虫 (小有名气)

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[求助] 关于cyt C问题

我现在要做cyt C 的western ，买的抗体型号是SC-13156，请问有人用这个抗体么？怎么样？我要做这个，蛋白预染marker要买多大的？就是要根据cyt C的蛋白大小而定。还有就是做cyt C一抗的稀释度是多少？请有经验的前辈高手指！！

[ Last edited by 瘪 on 2011-7-18 at 20:38 ]

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1楼 2011-07-18 20:35:20

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xiaolangzzy

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

瘪(金币+5): 2011-07-27 08:26:10

根据我的经验，细胞色素c (cyt c)的分子量约为12kd，能够通过15%的SDS-PAGE较好地分离开，但是应注意染料条带不能跑过距离胶底1/3处，而且蛋白电转的时间不能太长（我用的是PVDF膜，方法为全湿法电转，条件为350mA，2h）。
santa的抗体虽然大部分不好用，但是cyt c的抗体还是比较好用的，稀释度记不清了，应该是1:1000吧。
我当时没有用预染的Marker，你若需要的话就买中分子量范围的就可以的。关键是在预实验的时候需要同时做一个阳性对照（购买的提纯的cyt c），不同物种的cyt c是非常保守相似的，所以不用担心抗体和购买的提出cyt c不合适的问题。
希望对你有帮助，祝好运！