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金虫 (小有名气)

[求助] 关于cyt C问题

我现在要做cyt C 的western ,买的抗体型号是SC-13156,请问有人用这个抗体么?怎么样?我要做这个,蛋白预染marker要买多大的?就是要根据cyt C的蛋白大小而定。还有就是做cyt C一抗的稀释度是多少?请有经验的前辈高手指!!

[ Last edited by 瘪 on 2011-7-18 at 20:38 ]
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金虫 (小有名气)

没有人知道?不会吧
2楼2011-07-19 09:31:38
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金虫 (小有名气)

还是没人知道,顶一下~
3楼2011-07-20 12:21:28
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

4楼2011-07-20 16:20:19
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-20 16:20:19:

3Q~可是还是没人回答,哎~
5楼2011-07-22 09:08:08
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金虫 (小有名气)

那我换个问题吧,这个分子量非常的小只有800多,请问做过WB的高手,这么小的分子量是不是不容易出结果,还有什么其他方法可以做这个蛋白么?又谁做过小分子量的蛋白的WB的么?
6楼2011-07-22 09:20:05
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-26 08:38:44
Maker的选择可以看公司的产品目录,上面会有各种maker的条带大小,只要范围覆盖你的蛋白的大小就可以用了。产品目录也可以跟当地的代理商索取,他们很乐意提供的。
Western Blot我做得很少,就不误人子弟了
7楼2011-07-22 09:28:32
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-22 09:28:32:
Maker的选择可以看公司的产品目录,上面会有各种maker的条带大小,只要范围覆盖你的蛋白的大小就可以用了。产品目录也可以跟当地的代理商索取,他们很乐意提供的。
Western Blot我做得很少,就不误人子弟了

恩,知道了。我要做的这个蛋白分子量非常的小,据说是跑不出来的,哎~再想想其他做这个蛋白的方法吧,我是还没做过,怎么也比我强多了~谢谢,呵呵~
8楼2011-07-22 09:49:53
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金虫 (小有名气)

dhd997: 可以通知版主处理,给几楼加分,或者退还金币 2011-07-26 08:38:29
没有人回答我的红包也给不出去难道就一直这个状态?
9楼2011-07-26 08:08:58
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

应该用Tricine-SDS-PAGE来电泳,普通的变性胶很难分离小分子量的蛋白质;凝胶的浓度为16.5%T和3%C就差不多;最关键的一步是转移后你的PVDF膜一定要在固定液中固定,否则在经过后续处理后小分子量的蛋白质基本上被洗脱或者扩散了,我们通常是在转移完毕后,先用超纯水漂洗一下膜,然后在TBS中过渡清洗5分钟左右,然后用含0.2%戊二醛的TBS固定45分钟,再依照WB的步骤处理后面的过程,后来能得到很好的结果,否则明明蛋白转移到膜上了,后来却消失不见,更不用说免疫检测了.

转自丁香园smjxc
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
10楼2011-07-26 09:03:34
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