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瘪

金虫 (小有名气)

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[求助] 关于cyt C问题

我现在要做cyt C 的western ，买的抗体型号是SC-13156，请问有人用这个抗体么？怎么样？我要做这个，蛋白预染marker要买多大的？就是要根据cyt C的蛋白大小而定。还有就是做cyt C一抗的稀释度是多少？请有经验的前辈高手指！！

[ Last edited by 瘪 on 2011-7-18 at 20:38 ]

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1楼 2011-07-18 20:35:20

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rb

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

应该用Tricine-SDS-PAGE来电泳，普通的变性胶很难分离小分子量的蛋白质；凝胶的浓度为16.5％T和3％C就差不多；最关键的一步是转移后你的PVDF膜一定要在固定液中固定，否则在经过后续处理后小分子量的蛋白质基本上被洗脱或者扩散了，我们通常是在转移完毕后，先用超纯水漂洗一下膜，然后在TBS中过渡清洗5分钟左右，然后用含0.2％戊二醛的TBS固定45分钟，再依照WB的步骤处理后面的过程，后来能得到很好的结果，否则明明蛋白转移到膜上了，后来却消失不见，更不用说免疫检测了.

转自丁香园smjxc