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金虫 (小有名气)

[求助] 关于cyt C问题

我现在要做cyt C 的western ,买的抗体型号是SC-13156,请问有人用这个抗体么?怎么样?我要做这个,蛋白预染marker要买多大的?就是要根据cyt C的蛋白大小而定。还有就是做cyt C一抗的稀释度是多少?请有经验的前辈高手指!!

[ Last edited by 瘪 on 2011-7-18 at 20:38 ]
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

应该用Tricine-SDS-PAGE来电泳,普通的变性胶很难分离小分子量的蛋白质;凝胶的浓度为16.5%T和3%C就差不多;最关键的一步是转移后你的PVDF膜一定要在固定液中固定,否则在经过后续处理后小分子量的蛋白质基本上被洗脱或者扩散了,我们通常是在转移完毕后,先用超纯水漂洗一下膜,然后在TBS中过渡清洗5分钟左右,然后用含0.2%戊二醛的TBS固定45分钟,再依照WB的步骤处理后面的过程,后来能得到很好的结果,否则明明蛋白转移到膜上了,后来却消失不见,更不用说免疫检测了.

转自丁香园smjxc
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
10楼2011-07-26 09:03:34
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金虫 (小有名气)

没有人知道?不会吧
2楼2011-07-19 09:31:38
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金虫 (小有名气)

还是没人知道,顶一下~
3楼2011-07-20 12:21:28
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-20 16:20:19:

3Q~可是还是没人回答,哎~
5楼2011-07-22 09:08:08
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