| 查看: 827 | 回复: 0 | ||
[求助]
限制酶SexAI的保护碱基和定向克隆问题
|
|
大家好： 请问限制酶SexAI的保护碱基怎么加？我打算加4个“Gs”，这样可以么？SexAI的识别序列是ACCWGGT(W=A/T)。我准备用SexAI做定向克隆，所用载体上游SexAI序列是5‘-ACCAGGT-3’;，下游SexAI序列是5‘-ACCTGGT-3’;(同一条链上的序列，即都在sense strand上，即：5‘-ACCAGGT-------------ACCTGGT-3‘) ，那么我的上下游引物的酶切位点怎么加啊？是加不同序列的SexAI， 5’-ACCAGGT-3‘+上游引物，5’-ACCTGGT-3‘+下游引物？这样好像无法连接到载体上，只能连接一头。还是加相同序列的SexAI，即：5’-ACCAGGT-3‘+上游引物， 5’-ACCAGGT-3‘+下游引物？这样的话插入片段就有可能以任意一个方向插入，即有两种方向的插入片段。 用不同序列的SexAI可以直接进行连接么？因为质粒双酶切（质粒上有两个不同序列的SexAI位点），酶切后形成的质粒两头的黏性末端是相同的（对么？原来这两个SexAI位点之间的序列就丢失了？），所以插入基因可以以任意一种方向连接，都会出现方向不正确和方向正确的序列。我有点陷进去了，大家帮我看是不是会产生两种方向的插入序列啊。 说明：两个SexAI位点分别位于质粒的两个MCS上，用的启动子是PnisA，具体序列如下图所示：   [ Last edited by mf2003 on 2011-7-15 at 10:11 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
0854复试调剂 276
已经有5人回复
-
欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考
已经有6人回复
-
0857调剂
已经有5人回复
-
279求调剂
已经有4人回复
-
284求调剂
已经有8人回复
-
材料复试调剂
已经有4人回复
-
本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分
已经有7人回复
-
求调剂
已经有6人回复
-
材料学硕318求调剂
已经有13人回复
-
一志愿郑大材料学硕298分，求调剂
已经有5人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
关于液质联用仪的污染问题
已经有14人回复
- 美国租房问题
已经有9人回复
- journal of thermal analysis and calorimetry自引率的问题
已经有4人回复
- 关于推荐信的问题
已经有12人回复
- 关于结晶度的问题！
已经有12人回复
- southern杂交问题
已经有12人回复
- 求推荐欧美名导师 环境科学/环境保护/地方病/大气颗粒物等等环境方面
已经有10人回复
- 求助 双酶切验证阳性克隆的问题
已经有12人回复
- 设计引物时酶切位点保护碱基的问题
已经有8人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 【求助/交流】限制性内切酶保护碱基
已经有20人回复
- 【求助/交流】请各位帮忙指点一下！约8000多碱基对的克隆子的转化需要什么转化技术比�
已经有4人回复
- 【求助/交流】pstI的保护碱基的加法
已经有4人回复
- 【求助/交流】求AgeⅠ(BshTⅠ)的保护碱基用什么？
已经有4人回复
- 限制性内切酶保护碱基设计和Buffer种类表【已搜索无重复】
已经有3人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
10