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福林酚法测发酵液中的多肽
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虫友们，我看到大家有的是用福林酚法测多肽的，但是我想用福林酚法测定真菌发酵液中的多肽，可发酵液里又有蛋白质，所以我想在测多肽前先把蛋白给去了，看文献是用三氯乙酸去的，可三氯乙酸是多大浓度呢？如果我先做个浓度梯度的话，接下来该怎么做呢？离心，去蛋白？再测？虫友们帮帮忙呀， |
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没人应吗？ 2楼2011-07-18 09:32:45
HarveyWang
捐助贵宾 (知名作家)
海外行者
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- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
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TCA 储存母液浓度为 10g/100 mL, 使用时取500 uL发酵上清液，加500 uLTCA储存液（就是使用浓度为 5g/L）。室温静置10-30min,然后10000rpm 离心2-5min，取此上清500 uL 加 500 uL 0.1~0.2 M NaOH将pH调成6.0-9.0（NaOH浓度自己摸索一下），然后取一定量的此溶液来测定多肽含量。注意，此测定液稀释了4倍。 发酵液加TCA沉淀蛋白后必须要用NaOH中和，否则太酸了。福林酚法中的碱不够，就不能够正常显色。但是，中和所用的NaOH浓度也不能过高，只要将TCA中和掉即可！ （最后测定的样品pH在6-9就行） 你可以用 z |
3楼2011-07-19 15:30:55