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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教两步和三步PCR的问题
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wulishu

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教两步和三步PCR的问题

请教一下：
94℃      30s                    
55℃*    30s                      98℃   10s
72℃      30s*                    68℃   1min*

试剂说明书里给了两个PCR反应条件，都可以，这两个的实际效果哪个好一些？
我的退火温度是68℃，对于我这个温度用这两个有区别吗？如果是55℃又有区别吗
请这两个都做过的老师帮我解答一下，谢谢！金币不多，请见谅。
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1楼 2011-07-11 09:08:23
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wulishu

新虫 (初入文坛)
★ ★
dhd997: 这个问题，你可以举报给版主，代为发放。 2011-07-12 19:33:13
西瓜(金币-2): 代发3楼的金币。 2011-07-13 11:29:48
引用回帖:
Originally posted by 双螺旋DNA at 2011-07-11 14:12:06:
2步法一般用于扩增比较小片段，退火和延伸是在一个温度下进行的，对于大片段最好还是用3步法。

谢谢你的帮助，不过你好像回帖的时候没选应助回帖，所以我没办法给你金币，不好意思了
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-07-12 10:45:03
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 鼓励 2011-07-11 10:26:23
wulishu(金币+2): 谢谢你的帮助！ 2011-07-11 11:14:26
两步法只是把退火和延伸的步骤合并了而已，一般只有某些定量PCR才会用到。如你所说，退火温度是68℃，用两步法也没什么影响。但如果退火温度和延伸温度相差太大（5℃以上），那最好还是用常规的三步法。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-07-11 10:08:30
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-12 19:32:44
西瓜(金币+2): 帮楼主发金币 2011-07-13 11:30:05
2步法一般用于扩增比较小片段，退火和延伸是在一个温度下进行的，对于大片段最好还是用3步法。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-07-11 14:12:06
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