应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教两步和三步PCR的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1458  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wulishu

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教两步和三步PCR的问题

请教一下：
94℃      30s                    
55℃*    30s                      98℃   10s
72℃      30s*                    68℃   1min*

试剂说明书里给了两个PCR反应条件，都可以，这两个的实际效果哪个好一些？
我的退火温度是68℃，对于我这个温度用这两个有区别吗？如果是55℃又有区别吗
请这两个都做过的老师帮我解答一下，谢谢！金币不多，请见谅。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-11 09:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulishu

新虫 (初入文坛)
★ ★
dhd997: 这个问题，你可以举报给版主，代为发放。 2011-07-12 19:33:13
西瓜(金币-2): 代发3楼的金币。 2011-07-13 11:29:48
引用回帖:
Originally posted by 双螺旋DNA at 2011-07-11 14:12:06:
2步法一般用于扩增比较小片段，退火和延伸是在一个温度下进行的，对于大片段最好还是用3步法。

谢谢你的帮助，不过你好像回帖的时候没选应助回帖，所以我没办法给你金币，不好意思了
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-07-12 10:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 鼓励 2011-07-11 10:26:23
wulishu(金币+2): 谢谢你的帮助！ 2011-07-11 11:14:26
两步法只是把退火和延伸的步骤合并了而已，一般只有某些定量PCR才会用到。如你所说，退火温度是68℃，用两步法也没什么影响。但如果退火温度和延伸温度相差太大（5℃以上），那最好还是用常规的三步法。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-07-11 10:08:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

双螺旋DNA

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-12 19:32:44
西瓜(金币+2): 帮楼主发金币 2011-07-13 11:30:05
2步法一般用于扩增比较小片段，退火和延伸是在一个温度下进行的，对于大片段最好还是用3步法。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-07-11 14:12:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +9 Koxui 2026-03-28 9/450 2026-03-29 20:43 by 无际的草原
[考研] 一志愿双一流机械285分求调剂 +4 幸运的三木 2026-03-29 5/250 2026-03-29 14:49 by Miko19
[考研] 318一志愿吉林大学生物与医药 求调剂 +4 笃行致远. 2026-03-28 4/200 2026-03-29 11:55 by longlotian
[考研] 348求调剂 +5 小懒虫不懒了 2026-03-28 5/250 2026-03-29 10:34 by 唐沐儿
[考研] 调剂求院校招收 +6 鹤鲸鸽 2026-03-28 6/300 2026-03-29 08:15 by fmesaito
[考研] 330分求调剂 +5 qzenlc 2026-03-29 5/250 2026-03-29 07:37 by 无际的草原
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求调剂 +5 0857求调剂. 2026-03-24 6/300 2026-03-28 22:04 by zhq0425
[考研] 083000学硕274求调剂 +8 Li李鱼 2026-03-26 8/400 2026-03-28 20:33 by 加油向未来啊
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +9 丹青奶盖 2026-03-26 10/500 2026-03-28 07:45 by barnett0632
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 材料调剂 +8 匹克i 2026-03-23 8/400 2026-03-27 08:11 by hypershenger
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 26考研-291分-厦门大学（085601）-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +3 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:22 by xcjcqu
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭