24小时热门版块排行榜    

查看: 1677  |  回复: 4

wulishu

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教两步和三步PCR的问题

请教一下:
94℃      30s                    
55℃*    30s                      98℃   10s
72℃      30s*                    68℃   1min*

试剂说明书里给了两个PCR反应条件,都可以,这两个的实际效果哪个好一些?
我的退火温度是68℃,对于我这个温度用这两个有区别吗?如果是55℃又有区别吗
请这两个都做过的老师帮我解答一下,谢谢!金币不多,请见谅。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 鼓励 2011-07-11 10:26:23
wulishu(金币+2): 谢谢你的帮助! 2011-07-11 11:14:26
两步法只是把退火和延伸的步骤合并了而已,一般只有某些定量PCR才会用到。如你所说,退火温度是68℃,用两步法也没什么影响。但如果退火温度和延伸温度相差太大(5℃以上),那最好还是用常规的三步法。
2楼2011-07-11 10:08:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

双螺旋DNA

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-12 19:32:44
西瓜(金币+2): 帮楼主发金币 2011-07-13 11:30:05
2步法一般用于扩增比较小片段,退火和延伸是在一个温度下进行的,对于大片段最好还是用3步法。
3楼2011-07-11 14:12:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulishu

新虫 (初入文坛)

★ ★
dhd997: 这个问题,你可以举报给版主,代为发放。 2011-07-12 19:33:13
西瓜(金币-2): 代发3楼的金币。 2011-07-13 11:29:48
引用回帖:
Originally posted by 双螺旋DNA at 2011-07-11 14:12:06:
2步法一般用于扩增比较小片段,退火和延伸是在一个温度下进行的,对于大片段最好还是用3步法。

谢谢你的帮助,不过你好像回帖的时候没选应助回帖,所以我没办法给你金币,不好意思了
4楼2011-07-12 10:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
5楼2011-07-16 08:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wulishu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
信息提示
请填处理意见