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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wulishu

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教两步和三步PCR的问题

请教一下:
94℃      30s                    
55℃*    30s                      98℃   10s
72℃      30s*                    68℃   1min*

试剂说明书里给了两个PCR反应条件,都可以,这两个的实际效果哪个好一些?
我的退火温度是68℃,对于我这个温度用这两个有区别吗?如果是55℃又有区别吗
请这两个都做过的老师帮我解答一下,谢谢!金币不多,请见谅。
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-12 19:32:44
西瓜(金币+2): 帮楼主发金币 2011-07-13 11:30:05
2步法一般用于扩增比较小片段,退火和延伸是在一个温度下进行的,对于大片段最好还是用3步法。
3楼2011-07-11 14:12:06
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 鼓励 2011-07-11 10:26:23
wulishu(金币+2): 谢谢你的帮助! 2011-07-11 11:14:26
两步法只是把退火和延伸的步骤合并了而已,一般只有某些定量PCR才会用到。如你所说,退火温度是68℃,用两步法也没什么影响。但如果退火温度和延伸温度相差太大(5℃以上),那最好还是用常规的三步法。
2楼2011-07-11 10:08:30
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wulishu

新虫 (初入文坛)

★ ★
dhd997: 这个问题,你可以举报给版主,代为发放。 2011-07-12 19:33:13
西瓜(金币-2): 代发3楼的金币。 2011-07-13 11:29:48
引用回帖:
Originally posted by 双螺旋DNA at 2011-07-11 14:12:06:
2步法一般用于扩增比较小片段,退火和延伸是在一个温度下进行的,对于大片段最好还是用3步法。

谢谢你的帮助,不过你好像回帖的时候没选应助回帖,所以我没办法给你金币,不好意思了
4楼2011-07-12 10:45:03
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