24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 19.4
散金: 360
帖子: 401
在线: 77.4小时
虫号: 1073675
注册: 2010-08-12
专业: 作物分子育种

[交流] 质粒稳定性的问题已有4人参与

目的片段转化连接后，挑单克隆摇菌，获得第一代菌，可是如果取第一代菌加入ＬＢ（含抗生素）再摇的话，连有目的片段的质粒会变吗？为什么我送的第一代菌液测序都挺正常的，可是第二代菌液测出来就好多不正常的呀？不是有碱基缺失就是根本找不到下游引物呢！从Ｔ载体上切目的片段，大家是不是都从第一代菌里提质粒切啊？还是可以一代一代的摇啊？

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

有价值的生物经验贴

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2011-07-10 19:27:28

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)

MolEPI: 54
应助: 0 (幼儿园)
金币: 2293.5
红花: 24
帖子: 529
在线: 186.9小时
虫号: 1320681
注册: 2011-06-11
性别: GG
专业: 生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

工业用菌确实存在很多问题，免不了质粒丢失严重，高突变等现象，但是一般工业用菌都是经过10代以上稳定筛选之后才用于小试、中试和工业生产的。菌体不稳定造可能成的损失巨大，所以鲜有工业用菌使用在2-3代菌就没有产量或者产量低的菌株。一般来说，一代菌用一点少一点，一代菌上罐太伤了，工业用菌一般会存储足够量的二代菌（多数是冷冻干燥安瓿管）用于生产，在生产中需要活化、制作摇瓶种子，如果菌体生长慢，还要进一步做种子罐，最后才能用于生产。如果菌体稳定性差，几代传下来，发酵的不稳定造成损失是很难估计的，而且一般不稳定菌都是先做小试、中试，成功后才能用于生产。

质粒在宿主中的稳定性确实需要进行筛选，实验中遇到的质粒突变能避免尽量避免，做好的质粒也不一定一直存放，由于不断的被用于各种改进实验，期间经过的大量筛选，避免了一代菌用完之后就没有更好的使用。使用高保真酶扩增、保证没有物理化学因素促变，使用合适的宿主，还是很容易得到没有突变的质粒的，后续连续传代培养也可以得到比较稳定的质粒的。