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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒稳定性的问题
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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 质粒稳定性的问题 已有4人参与

目的片段转化连接后，挑单克隆摇菌，获得第一代菌，可是如果取第一代菌加入ＬＢ（含抗生素）再摇的话，连有目的片段的质粒会变吗？为什么我送的第一代菌液测序都挺正常的，可是第二代菌液测出来就好多不正常的呀？不是有碱基缺失就是根本找不到下游引物呢！从Ｔ载体上切目的片段，大家是不是都从第一代菌里提质粒切啊？还是可以一代一代的摇啊？
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1楼 2011-07-10 19:27:28
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 足下客 at 2011-07-11 13:24:31:
重组质粒转入菌中，发生突变是非常常见的现象。目前，工业上用于大型发酵的菌株，大部分都是用第一代基因工程菌上罐，现在基因工程菌在很多行业都受到了限制，出于它的安全性考虑，非常不稳定 。
所以说要想避免 ...

每次活化以后还要测序验证，那岂不是很麻烦呢！
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7楼2011-07-11 21:14:25
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 鼓励 鼓励 2011-07-10 20:37:08
不可能总是用第一代的呀，我们都是一代一代的摇的，没你说的问题。
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2楼2011-07-10 19:48:03
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 学习一下 2011-07-10 20:37:20
我们也遇到过相同的问题，有些质粒只在第一代菌里面是正确的，接种之后摇出来的菌全是错误的，解决的方法是多转几种不同的感受态细胞，找出能在里面稳定克隆的菌株。
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-07-10 19:50:05
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gwbk

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+1): 有解决办法吗 2011-07-11 07:44:08
这个确实是一个问题，我也出现了这种问题，不过是在换载体后出现的，想起来挺郁闷的。
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4楼2011-07-10 21:48:28
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