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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建全长cDNA中连接的问题
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

[求助] 构建全长cDNA中连接的问题

各位朋友：
   我现在要构建全长的cDNA，全长是15186bp，分为12个目的片段。分别连在T载体上了。设计了一系列的酶切连接方案，要连到 PMC18 质粒上，这是一个低拷贝的质粒。现今T载体上和PMC18 上各连了3个目的片段，另外一个PMC18 连接了2个目的片段，可之后的连接之路依旧很艰难。请求朋友们给点好的连接方法，想法。多谢！
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blackrose8089

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生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
1楼 2011-07-09 11:34:23
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
10楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-28 15:58:25:
去分子生物学论坛看了一下，小虫要讲文献了，随后看了一下小虫的帖子，发现能解答一些，索性全部看了一遍！

13楼2011-08-28 16:52:30
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
帮顶！很活跃的小虫，继续努力哦！

3.1新虫
考虑到对新虫的鼓励和照顾，当前金币小于50，或者注册日期不超过1个月的虫友列为新虫。其他均不在新虫照顾之列。对新虫的处罚从轻，奖励从重。

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2994095
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2楼2011-07-09 12:24:23
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-09 12:24:23:
帮顶！很活跃的小虫，继续努力哦！

3.1新虫
考虑到对新虫的鼓励和照顾，当前金币小于50，或者注册日期不超过1个月的虫友列为新虫。其他均不在新虫照顾之列。对新虫的处罚从轻，奖励从重。

[url]h ...

我还是新虫啊，我都是铜虫了哇。
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生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
3楼2011-07-09 14:21:52
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
青菜小虫(金币+2): 我就是这么做的啊，我现在有3个同步的质粒，顺序就是1234,7896,101112分别连。我的困惑是现在目的片段往每一个质粒上连接都很艰难，连不上了。 2011-07-09 16:08:16
dhd997(金币+2): good 2011-07-09 18:17:38
青菜小虫(金币+1): 谢谢帮助。 2011-07-11 14:15:50
西瓜(金币+2): Good!补上EPI！ 2011-07-13 22:52:38
西瓜(EPI+1): 连楼下一起 2011-07-15 17:46:13
把12个片段尽量按顺序分成3-4组同时去连载体，如果酶切位点设计的足够合理的话不按顺序也没什么问题。等这3-4个都验证正确后再互连。
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-07-09 15:52:53
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