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右岸晴雨

铜虫 (初入文坛)

[求助] 药物的细胞毒性问题

用MTT法做药物的细胞毒性,寻找药物的最大无毒浓度,怎么处理数据,需要用什么软件吗?如何做?我运用公式计算药物对细胞的抑制率:抑制率=(正常细胞对照组OD值-加药组OD值)/正常细胞对照组OD值,我的药物都稀释到0.78mg/L了,抑制率还达不到0%,能不能说抑制率在10%以内就认为对细胞无毒性了呢?
还有一个问题,如何确定96孔板的铺板细胞密度呢?细胞太稀,OD值太小不行,细胞密度太大,会导致细胞长的过满,那么以一种什么形式去确定合适的细胞接种密度呢?
各位,如能给些建议,不胜感激!
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flesymgo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

右岸晴雨(金币+5): 2011-07-07 15:43:22
1.对于细胞密度的问题,每种细胞的大小和生长速度都不一样,建议先做一个不同密度细胞的空白试验,来确定最合适的浓度。
2.关于抑制率的问题,LZ计算没问题,有些药的毒性就是比较大,而且看到有些人说MTT的误差有可能在10%左右,所以,抑制率如果在10%以内基本可以说无明显毒性了。或者再稀释一些,我现在做的这个药就要稀释到0.5mg/L.建议稀释的比例放大些,可10倍或5倍的稀释,多做几个梯度,这样整体的趋势就会比较明显,另外n要大于5。
做现在能做的,想现在该想的.
2楼2011-07-07 14:24:38
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右岸晴雨

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by flesymgo at 2011-07-07 14:24:38:
1.对于细胞密度的问题,每种细胞的大小和生长速度都不一样,建议先做一个不同密度细胞的空白试验,来确定最合适的浓度。
2.关于抑制率的问题,LZ计算没问题,有些药的毒性就是比较大,而且看到有些人说MTT的误差 ...

谢谢您给的意见,
麻烦再问一下,做不同密度细胞的空白实验来确定最合适的浓度,是不是就简单看一下细胞有没有长满?还是具体怎么做?我有看到说为了保证实验结果的线性,MTT实验的吸光值最好在0-0.7范围内,这个跟细胞接种密度有关系吧?
3楼2011-07-07 15:43:04
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flesymgo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 右岸晴雨 at 2011-07-07 15:43:04:
谢谢您给的意见,
麻烦再问一下,做不同密度细胞的空白实验来确定最合适的浓度,是不是就简单看一下细胞有没有长满?还是具体怎么做?我有看到说为了保证实验结果的线性,MTT实验的吸光值最好在0-0.7范围内, ...

对,吸光度肯定是跟细胞密度有关的。不光要看细胞有没有长满(最好是不要长太满)还要用MTT法测一下吸光度,在0.2-0.8之间,线性是最好的。
做现在能做的,想现在该想的.
4楼2011-07-08 16:32:15
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