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xiaohong88

银虫 (小有名气)

[求助] 菌体生长量

各位好:
       我对一株放线菌进行种子培养基的优化,看到有的文献说指标为菌丝生长量。我想问一下这个菌丝生长量是指稳定期的菌丝量吗?是不是稳定期的菌丝量比较大,在一定的程度上也表明对数期的生长速率比较快?
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-07-13 16:00:48
因为发酵开始,都说接种量得问题,所以我理解你看的那篇文献应该是指接种时刻的生长量把。

种子培养基的优化比较复杂。

首先明确种子这个阶段是斜面(或甘油管)过渡到上罐发酵的一个菌体获得阶段。
那么这一阶段的本质要求是什么呢?就是获得一定量的可以自食其力可以从事大生产的劳力。
2楼2011-07-07 09:58:35
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

★ ★
rainwander(金币+2): 你可以一个帖子编辑完,很不错,鼓励一下 2011-07-13 16:01:20
还没说法呢

而种子培养基的组分也是一种过渡,即和发酵培养基有像的地方。很关键的。比如葡萄糖,生长因子。。。。总之,这一设计的初衷就是,不能养很多白吃,但又不能一时半会儿长不成一个适量群体。

所以,我觉得单纯的拿生长量来衡量种子是不恰当的。
3楼2011-07-07 10:01:49
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)


总是自己自动发帖呢?

种子的质量包括了种子数量,但不是全部。然而我们做发酵时一般都说接种量百分之多少。这就需要考虑更多的信息,种子长到什么程度了,成熟了吗?实质就是一种代谢状态,有的种子是拿生物量衡量,有的是拿pH。。。。很多。但你这一优化好像就不行了,组分变了啊~

所以,最好是拿发酵效价作为指标。

即,先限定一个时间,之后每隔N小时后去接发酵
根据最终发酵结果来评判用哪个组分、那个状态的种子
4楼2011-07-07 10:08:31
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xiaohong88

银虫 (小有名气)

好难,有点不太明白,您的意思就是说在进行种子培养基优化时的指标是根据发酵产物的效果来进行评价?
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5楼2011-07-08 15:30:24
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xiaohong88 at 2011-07-08 15:30:24:
好难,有点不太明白,您的意思就是说在进行种子培养基优化时的指标是根据发酵产物的效果来进行评价?

是啊,看发酵的效价来看用哪个种子。
6楼2011-07-08 15:33:24
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xiaohong88

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by iaminxanadu at 2011-07-08 15:33:24:
是啊,看发酵的效价来看用哪个种子。

您好,我又重新看了您的帖子,并再思考了一下
1、您之前提到的说把种子液进行培养,每隔N个小时后拿去进行发酵,这就相当于是在做种龄的实验了吧。
2、而我现在要做的是种子液培养基的优化实验,那就相当于只是改变培养基的成分,而所有其它的因素都先把它固定下来,包括种龄也要固定下来。
3、我现在还有几个问题感到有点困惑,想要请教一下,我一开始把无菌水倒入斜面,制备孢子悬浮液,这个无菌水的量应该是多少,怎么来确定呢?完了之后,我再按照一定的比例接入有不同比例的种子培养基中。到了这一步后,我看了许多的文献,文献上都有确定的时间,比例说培养了20小时,或是12小时的,完了之后再进行发酵。我想问这个时间他们是怎么确定的?是之前已经做了生长曲线,知道在相同的条件下这个时间段是对数期吗?
谢谢!
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7楼2011-07-12 21:39:35
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, EPI+1): 2011-07-13 16:01:36
首先回答一下孢子悬液的问题。

工业上一般制作孢子都是用装液量是100ml茄形瓶来做,最后等孢子成熟后加50ml甘油水或DMSO(20%),刮下玻璃珠振荡,分装1~1.5ml。保存。

实验室里9厘米的平板,20ml......

这也只是一个习惯做法,不是每种防线菌都一定要这样。但要保证孢子浓度,一般不低于10^9ml^-1

再来说一下原来的问题。

种子的培养基优化也好、种龄也好,本质上是相联系的。不能单纯的拿一个指标进行优化,即便你看到某些文献这样做了,那是为了研究影响因素。

你固定了种龄去优化培养基时,会得到较优的结果,但这里面可能存在遗漏。

比如说,你固定在35小时。开始实验:第一组配方A1+B2+C3+D4,第二组A2+B3+C4+D1.......,你得出了第一组结果最好。但很可能你要是延长或缩短了种龄,第二组的结果会更好。

所以,要看发酵结果来反推哪个培养基,哪个时间的培养基最佳。

不知道,我说的清楚不?
8楼2011-07-13 09:11:31
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
rainwander(金币+3, EPI+1): 2011-07-13 16:01:51
还有个问题刚看到。关于种龄的确定。

文献上的时间,当然是通过大量实验摸索的啊。


并且不是通过生长曲线来确定的。生长曲线很明确的分了几个阶段,对数生长期来说,也不是一个点,是一段时间,那么怎么种龄的时间一般都说成一个点:比如培养24小时,或培养36小时,但很少说培养20~24小时。即便有,那也是通过实验知道了这段时间都行(影响不大),或者是一种估测,或者是为了保密。

前阶段我发了个相关的帖子,忘了在哪了。总之,生长曲线的不是那么重要,重要的是看种子的状态,生理状态的“好坏”,要看对发酵结果的影响。

一个种子培养基里都是葡萄糖,长的没的说,本来28小时成熟,现在呢14小时OK了,敢用吗?
刚开始的回帖中,我说的就是这个意思。14小时的种子也长够了,但生理状态呢?微观上的基因表达呢?是不是培养过程中淀粉利用相关的酶类转录表达过程变化了?会不会影响下游发酵?会不会富集了那些懒汉?到发酵培养里谁干活?怎么产出?


首先得知道种子培养的目的是什么?

种子培养就是为发酵做准备。这种准备既是量上的准备,也是质上的准备。配方也是作为一种过渡。即在一定时间内获得一定生理状态的菌体。

为什么看起来这么纠结呢?因为,我们还没有透彻的了解这个过程,这个过程的关键点是什么不知道,所以不能只看种龄。
9楼2011-07-13 09:34:05
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xiaohong88

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by iaminxanadu at 2011-07-13 09:11:31:
首先回答一下孢子悬液的问题。

工业上一般制作孢子都是用装液量是100ml茄形瓶来做,最后等孢子成熟后加50ml甘油水或DMSO(20%),刮下玻璃珠振荡,分装1~1.5ml。保存。

实验室里9厘米的平板,20ml......

...

您好,关于这个问题我好像明白了您所说的,但要是这样子的话就又要考虑这个因素又要考虑那个因素,实验。。。。
我是这么想的,在做单因素的时候就只考虑一个,回头在做正交的时候不就可以把所有因素都综合考虑了嘛,我是这么想的,不知道可不可以 ?
不断追逐自己的梦想!
10楼2011-07-13 11:04:42
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