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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, EPI+1): 2011-07-13 16:01:36
首先回答一下孢子悬液的问题。

工业上一般制作孢子都是用装液量是100ml茄形瓶来做,最后等孢子成熟后加50ml甘油水或DMSO(20%),刮下玻璃珠振荡,分装1~1.5ml。保存。

实验室里9厘米的平板,20ml......

这也只是一个习惯做法,不是每种防线菌都一定要这样。但要保证孢子浓度,一般不低于10^9ml^-1

再来说一下原来的问题。

种子的培养基优化也好、种龄也好,本质上是相联系的。不能单纯的拿一个指标进行优化,即便你看到某些文献这样做了,那是为了研究影响因素。

你固定了种龄去优化培养基时,会得到较优的结果,但这里面可能存在遗漏。

比如说,你固定在35小时。开始实验:第一组配方A1+B2+C3+D4,第二组A2+B3+C4+D1.......,你得出了第一组结果最好。但很可能你要是延长或缩短了种龄,第二组的结果会更好。

所以,要看发酵结果来反推哪个培养基,哪个时间的培养基最佳。

不知道,我说的清楚不?
8楼2011-07-13 09:11:31
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
rainwander(金币+3, EPI+1): 2011-07-13 16:01:51
还有个问题刚看到。关于种龄的确定。

文献上的时间,当然是通过大量实验摸索的啊。


并且不是通过生长曲线来确定的。生长曲线很明确的分了几个阶段,对数生长期来说,也不是一个点,是一段时间,那么怎么种龄的时间一般都说成一个点:比如培养24小时,或培养36小时,但很少说培养20~24小时。即便有,那也是通过实验知道了这段时间都行(影响不大),或者是一种估测,或者是为了保密。

前阶段我发了个相关的帖子,忘了在哪了。总之,生长曲线的不是那么重要,重要的是看种子的状态,生理状态的“好坏”,要看对发酵结果的影响。

一个种子培养基里都是葡萄糖,长的没的说,本来28小时成熟,现在呢14小时OK了,敢用吗?
刚开始的回帖中,我说的就是这个意思。14小时的种子也长够了,但生理状态呢?微观上的基因表达呢?是不是培养过程中淀粉利用相关的酶类转录表达过程变化了?会不会影响下游发酵?会不会富集了那些懒汉?到发酵培养里谁干活?怎么产出?


首先得知道种子培养的目的是什么?

种子培养就是为发酵做准备。这种准备既是量上的准备,也是质上的准备。配方也是作为一种过渡。即在一定时间内获得一定生理状态的菌体。

为什么看起来这么纠结呢?因为,我们还没有透彻的了解这个过程,这个过程的关键点是什么不知道,所以不能只看种龄。
9楼2011-07-13 09:34:05
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