| 查看: 3598 | 回复: 24 | |||
| 本帖产生 3 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
paulajjh木虫 (著名写手)
|
[求助]
重组蛋白结合不到ni柱上
|
||
|
如题，我做一种重组蛋白酶，第一次诱导表达后，蛋白很容易就结合到镍柱上了，用的国产的镍柱；但第二次，就根本结合不上，全部穿过去了，怀疑是镍柱的问题，又更换了GE的填料，还是全部穿过。 各位高手请帮忙分析一下，是什么原因造成的，为什么第一次可以，后来就结合不上了呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有89人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
shuifen1108
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 7
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 802.8
- 散金: 50
- 红花: 8
- 帖子: 705
- 在线: 133.9小时
- 虫号: 903554
- 注册: 2009-11-15
- 性别: MM
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
【答案】应助回帖
paulajjh(金币+3): 2011-07-07 17:23:23
| 我觉得LZ应该把过下来的蛋白上清，binding，Wash和最后的Elute溶液再加上蛋白Marker跑SDS-PAGE胶，看看到底哪个溶液中有你的目标蛋白，理论上一般情况下，只要标签在第一次是正常的，后面就不会有问题。你泡完胶之后，看目标蛋白有没有表达，在过柱后的哪个溶液中，这样才比较好判断是不是Ni柱填料的问题，还是过柱溶液的梯度不合适导致目标蛋白没有纯化出来。一般Ni柱还是比较禁折腾的，我觉得，我们用的Ni柱填料都三年了，而且使用频率很高，把填料完全重生之后还是可以挂住目标蛋白的，就是挂住的效率没有新柱高，所以Wash里面会有些目标蛋白 |
paulajjh13楼2011-07-07 16:27:28
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
2楼2011-07-06 15:18:49
3楼2011-07-06 16:53:00
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MolEPI: 46
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19297.6
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6567
- 在线: 2767.8小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
4楼2011-07-06 17:16:31