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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 放线菌基因组DNA提取后，用TE不溶！！？
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)

[求助] 放线菌基因组DNA提取后，用TE不溶！！？

如题，用的方法和以前一样，以前提取后，加入TE立刻就溶，现在怎么都不容了，求原因！！！！
我配置的溶液（10%sds，TE，蛋白酶K-20度保存）是两个月前的会不会有影响？
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1楼 2011-07-05 15:50:04
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 非常热心，鼓励之 2011-07-13 08:04:48
引用回帖:
Originally posted by amose at 2011-07-12 10:49:54:
是不是Marker太小了你用的是多少bp的啊，我提放线菌基因组跑胶是100v，35分钟左右，时间是要看你指示剂跑得情况，一般指示剂到倒数第二个线进行了
对了你提的是放线菌么？怎么进行细胞破碎的？

Marker为Lambda Mix Marker ，19.最大的48502kb。不是过小。
我的是阳性菌，用溶菌酶破壁。
你用的凝胶浓度为多少？
对基因组来说，分子片段较大，理论上应该是低电压，长时间的，你怎么用这么高的电压，这么短的时间？请问你电泳效果如何？可不可以传图上来？
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13楼2011-07-13 07:40:25
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★
蓝月望宁(金币+1): 2011-07-05 16:38:07
1949stone(金币+1): dna的问题吧 就算变质也还还是可以溶解的 2011-07-05 19:44:02
首先要排除TE变质的可能性；
其次就是你最后提取出来的基因组DNA是否杂质太多。。。。
实在不行换其它的可以溶解DNA的试剂溶解试试看，如果还是不能溶解，那么肯定是杂质太多了。
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2楼2011-07-05 16:31:16
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-07-05 09:31:16:
首先要排除TE变质的可能性；
其次就是你最后提取出来的基因组DNA是否杂质太多。。。。
实在不行换其它的可以溶解DNA的试剂溶解试试看，如果还是不能溶解，那么肯定是杂质太多了。

请问下TE如何变质的？就算变质了也是可以溶解DNA的呀，TE什么条件变质？谢谢
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3楼2011-07-05 16:37:38
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
dhd997(金币+1): 这种溶液不会损坏电极吧 2011-07-09 18:13:30
测下pH，TE是弱碱性的。
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4楼2011-07-05 16:46:32
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