24小时热门版块排行榜    

查看: 6127  |  回复: 21

lixuepu

金虫 (正式写手)

[求助] 量子点与抗体的偶联

最近在做一个量子点与羊抗猪的IgG的偶联,也就是我的二抗,分子量大概150KD,我加的NHS和EDC的比例一般是1.2:1,量子点是巯基丙酸修饰的,量子点和EDC比例大概1:1000,一般先加EDC,NHS活化量子点半小时,再加1.2倍的IgG但是每次练完之后连上蛋白的量子点很少,用100KD的超滤管超滤后量子点位置几乎都没有荧光了,做了几次后面的免疫,效果都很差,比如EDC和NHS,我也换了其他的比例,但是效果都很差,我之前用BSA做完之后,做电泳效果还好…… 但是这个IgG总是连不上,跪求高人指导啊………………
回复此楼
奋斗就有希望。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

qinyubinglan

铁虫 (正式写手)

将军

【答案】应助回帖

lixuepu(金币+4): 谢谢额 2011-07-04 08:19:05
引用回帖:
Originally posted by lixuepu at 2011-07-03 16:12:07:
最近在做一个量子点与羊抗猪的IgG的偶联,也就是我的二抗,分子量大概150KD,我加的NHS和EDC的比例一般是1.2:1,量子点是巯基丙酸修饰的,量子点和EDC比例大概1:1000,一般先加EDC,NHS活化量子点半小时,再加1. ...

量子点与抗体连接,单独的EDC就可以,反应的PH值应该在酸性的条件下,一般在水中就可以,具体做法是先用EDC(不要加太多,这个很重要,要不量子点会沉淀,一般是量子点摩尔浓度的100倍就很好),活化羧基的QD,然后加入抗体。在反应几个小时,在摇床上效果更好。祝你成功。
3楼2011-07-03 20:26:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ashui001

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

lixuepu(金币+3): 2011-07-08 11:41:39
你EDC加的量太多了,量子点:EDC一般1:100就可以了,还有你加的IgG也少了点,量子点:IgG要1::10以上吧,这样才链接的多点
kundaobio.com,昆道生物,量子点合成、修饰及其生物医学应用,量子点荧光抗体定制和服务
10楼2011-07-06 11:51:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lixuepu

金虫 (正式写手)

顶一下啊,别沉了…… 希望大家指导下
奋斗就有希望。
2楼2011-07-03 18:32:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ruoruo051987

禁虫 (职业作家)

lixuepu(金币+3): 谢谢额 2011-07-04 08:19:19
本帖内容被屏蔽

4楼2011-07-03 21:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixuepu

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by qinyubinglan at 2011-07-03 20:26:06:
量子点与抗体连接,单独的EDC就可以,反应的PH值应该在酸性的条件下,一般在水中就可以,具体做法是先用EDC(不要加太多,这个很重要,要不量子点会沉淀,一般是量子点摩尔浓度的100倍就很好),活化羧基的QD, ...

谢谢,我试试单独用EDC偶联吧…………
奋斗就有希望。
5楼2011-07-04 08:19:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixuepu

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by ruoruo051987 at 2011-07-03 21:05:30:
QDs和二抗偶联相对来说还是比较容易的,EDC法偶联时对量子点的荧光强度淬灭较大,可以尝试用巯基乙醇处理二抗,然后与羧基化量子点偶联,这样偶联后荧光强度还是比较强的,祝你成功,有事可以站内mail

荧光强度无所谓,后面我不用荧光检测的,就是现在总是偶联不上,不知问题出在哪?
奋斗就有希望。
6楼2011-07-04 08:20:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixuepu

金虫 (正式写手)

顶一下,别沉了…………
奋斗就有希望。
7楼2011-07-04 11:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伊娃EVA

金虫 (职业作家)

我也想问怎么连~~~~~

我也连不上  连上透析后没有荧光
http://weibo.com/u/3866814223
8楼2011-07-06 09:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tommayer

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

lixuepu(金币+3): 2011-07-08 11:41:32
这东西怕NHS的,一加进去马上荧光就没了,单独用EDC还好,但是偶联完之后荧光还是淬灭很多。量子点不测荧光还能测什么啊?
9楼2011-07-06 10:37:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lixuepu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +4 炎黄贵胄 2026-08-22 5/250 2026-08-24 02:09 by 流流伤
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见