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lixuepu

金虫 (正式写手)

[求助] 量子点与抗体的偶联

最近在做一个量子点与羊抗猪的IgG的偶联，也就是我的二抗，分子量大概150KD，我加的NHS和EDC的比例一般是1.2：1，量子点是巯基丙酸修饰的，量子点和EDC比例大概1：1000，一般先加EDC,NHS活化量子点半小时，再加1.2倍的IgG但是每次练完之后连上蛋白的量子点很少，用100KD的超滤管超滤后量子点位置几乎都没有荧光了，做了几次后面的免疫，效果都很差，比如EDC和NHS，我也换了其他的比例，但是效果都很差，我之前用BSA做完之后，做电泳效果还好…… 但是这个IgG总是连不上，跪求高人指导啊………………
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奋斗就有希望。
1楼 2011-07-03 16:12:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

qinyubinglan

铁虫 (正式写手)

将军

【答案】应助回帖

lixuepu(金币+4): 谢谢额 2011-07-04 08:19:05
引用回帖:
Originally posted by lixuepu at 2011-07-03 16:12:07:
最近在做一个量子点与羊抗猪的IgG的偶联，也就是我的二抗，分子量大概150KD，我加的NHS和EDC的比例一般是1.2：1，量子点是巯基丙酸修饰的，量子点和EDC比例大概1：1000，一般先加EDC,NHS活化量子点半小时，再加1. ...

量子点与抗体连接，单独的EDC就可以，反应的PH值应该在酸性的条件下，一般在水中就可以，具体做法是先用EDC（不要加太多，这个很重要，要不量子点会沉淀，一般是量子点摩尔浓度的100倍就很好），活化羧基的QD，然后加入抗体。在反应几个小时，在摇床上效果更好。祝你成功。
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3楼2011-07-03 20:26:06
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ashui001

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

lixuepu(金币+3): 2011-07-08 11:41:39
你EDC加的量太多了，量子点：EDC一般1：100就可以了，还有你加的IgG也少了点，量子点：IgG要1：:10以上吧，这样才链接的多点
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kundaobio.com,昆道生物，量子点合成、修饰及其生物医学应用，量子点荧光抗体定制和服务
10楼2011-07-06 11:51:05
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普通回帖

lixuepu

金虫 (正式写手)
顶一下啊，别沉了…… 希望大家指导下
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奋斗就有希望。
2楼2011-07-03 18:32:24
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ruoruo051987

禁虫 (职业作家)
lixuepu(金币+3): 谢谢额 2011-07-04 08:19:19
本帖内容被屏蔽
4楼2011-07-03 21:05:30
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lixuepu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qinyubinglan at 2011-07-03 20:26:06:
量子点与抗体连接，单独的EDC就可以，反应的PH值应该在酸性的条件下，一般在水中就可以，具体做法是先用EDC（不要加太多，这个很重要，要不量子点会沉淀，一般是量子点摩尔浓度的100倍就很好），活化羧基的QD， ...

谢谢，我试试单独用EDC偶联吧…………
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奋斗就有希望。
5楼2011-07-04 08:19:56
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lixuepu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ruoruo051987 at 2011-07-03 21:05:30:
QDs和二抗偶联相对来说还是比较容易的，EDC法偶联时对量子点的荧光强度淬灭较大，可以尝试用巯基乙醇处理二抗，然后与羧基化量子点偶联，这样偶联后荧光强度还是比较强的，祝你成功，有事可以站内mail

荧光强度无所谓，后面我不用荧光检测的，就是现在总是偶联不上，不知问题出在哪？
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奋斗就有希望。
6楼2011-07-04 08:20:52
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lixuepu

金虫 (正式写手)
顶一下，别沉了…………
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奋斗就有希望。
7楼2011-07-04 11:55:21
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伊娃EVA

金虫 (职业作家)
我也想问怎么连~~~~~

我也连不上  连上透析后没有荧光
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http://weibo.com/u/3866814223
8楼2011-07-06 09:48:23
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tommayer

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

lixuepu(金币+3): 2011-07-08 11:41:32
这东西怕NHS的，一加进去马上荧光就没了，单独用EDC还好，但是偶联完之后荧光还是淬灭很多。量子点不测荧光还能测什么啊？
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9楼2011-07-06 10:37:15
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