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yuliansheng

金虫 (小有名气)

[求助] 关于限制性内切酶的失活

今天做实验,突然被一个问题蒙住了。学得不好,请高手们赐教。
在基因重组过程中,进行限制性内切酶酶切后,要对限制性内切酶的失活,每个酶都有自己对应的失活温度,我所用的酶组的失活温度是100°。这样的温度一下使我想起PCR的解链温度,大概也就在90多度。那试问一下,这样高的失活温度,不会导致基因双链分离吗?
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shusheng2006

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

嗯。楼上说得对。如果要进行第二步酶切也可以选择用酚氯仿简单抽提下~
9楼2011-07-03 17:45:59
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖


dhd997(金币+1): 2011-07-01 19:29:53
没必要那么高吧,一般最高也就80℃了。
Thank-you,so-blue.
2楼2011-07-01 17:21:27
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

★ ★
dhd997(金币+2): 2011-07-01 19:30:06
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-07-01 17:21:27:
没必要那么高吧,一般最高也就80℃了。

我用的是TOYOBO东洋纺公司生产的限制性内切酶,每个酶都有自己严格的失活温度,所以必须按要求。比如,我用的是限制性内切酶SphⅠ和BglⅡ,这两个酶的失活温度全都是100° 5分钟。
学习....
3楼2011-07-01 18:26:35
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1): 2011-07-01 19:30:11
即使高温基因双链分离后降温会重新成双链的。
4楼2011-07-01 18:36:11
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