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2006tuyi

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[交流] 电转化以及抽质粒问题已有3人参与

将穿梭质粒pMG36E（红霉素抗性）电转到乳酸片球菌里面（野生型的），涂板后长出单菌落，然后同时将一个单菌落接种到液体培养基以及接种到另一块新鲜的带有抗生素的的平板上，液体培养菌体长好后抽质粒抽得出来，证明转进去了。可是从转涂的平板上挑菌落养菌抽质粒却怎么也抽不出来，这是为什么啊？

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1楼 2011-06-28 15:02:50

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天使托

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T.Shen

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1949stone(EPI+1): epi大神 2011-06-28 17:45:27

1：很有可能是你没有将质粒提取出来，即便你的培养基上的抗生素抗性丧失，质粒也不会那么容易丢的；所以你重复一下，看看是否可以提取出来。
2：你挑取的两个单克隆中，是不是同一批长出来的，如果一个大一个小的话，很有可能小的是卫星菌落，就是不带质粒的；

祝好运！

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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!

2楼2011-06-28 16:30:39

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2006tuyi

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我重复好多次了，都是抽不出来，而且觉得抽质粒方法应该没什么问题。我做过3次电转，第一次直接从电转后涂的板上挑菌（挑了5个），长好后抽质粒（分三次抽的），都能抽出来。补充一下，我是用革兰氏阴性菌的质粒小抽试剂盒配合溶菌酶进行抽的，加入溶液1的同时添加15mg/mL的溶菌酶，37度30分钟，然后再按照说明书一步步来做的。而且我上面讲的涂板和接种到液体培养基挑的是同一个菌落（用接种针挑一半划线用牙签将另外一半挑到液体培养基中）。

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3楼2011-06-28 20:28:42

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